【摘 要】
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目的:分离和培养大鼠骨髓干细胞,探索心肌细胞对骨髓干细胞向心肌细胞定向诱导分化的作用及其生物学特性.方法:①密度梯度离心法和细胞贴壁法相结合培养骨髓干细胞:取大鼠四
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目的:分离和培养大鼠骨髓干细胞,探索心肌细胞对骨髓干细胞向心肌细胞定向诱导分化的作用及其生物学特性.方法:①密度梯度离心法和细胞贴壁法相结合培养骨髓干细胞:取大鼠四肢骨,用培养液反复冲洗骨髓腔和其两端,细胞悬液经不锈钢滤网过滤后,加在等量的60％体积比的细胞分离液(1.073g/ml percoll液)上,离心2400rpm,20分钟,取中间层细胞,用培养液洗涤后.将收获的细胞加在含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基中,直到细胞在瓶底几乎融合成单层.0.25％的胰蛋白酶消化传代,约7-10天细胞密度接近于80％.当细胞传到第二代时,等待与心肌细胞混合.②胰蛋白酶消化法培养心肌细胞:取乳鼠心尖部心肌,用剪子将其剪成1mm<3>大小的碎块,用含0.06％胰蛋白酶的消化液在磁刀搅拌器上37℃消化.取上清,离心并将沉淀的细胞洗涤两次,以差速贴壁分离技术纯化.③骨髓干细胞与心肌细胞混合培养:传2代骨髓干细胞用浓度为0.01mmol/L的Brdu在培养基内标记24小时,与心肌细胞按1:1比例混合.④检测指标:a骨髓干细胞在光学显微镜下的动态变化;b HE染色骨髓干细胞和混合后细胞;c 电镜学检测骨髓干细胞和混合后细胞;d 行Brdu+α-sarcomeric Actin的免疫细胞化学检测.
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