本文对分离自自然发酵乳制品中20株Lactobacillus buchneri进行耐酸耐胆盐筛选,对耐酸耐胆盐性状优良株L.buchneri IMAU80233发酵工艺进行优化,试验结果如下:(1)耐酸耐胆盐筛选试验结果表明L.buchneri IMAUU80233在模拟人工胃肠液存活率为53.21%,在含牛胆盐MRS培养基内生长延滞期为0.24 h。(2)试验在MRS培养基的基础上,以单因素试验和响应面优化试验为理论依据,以最大比生长速率为主要指标对L.buchneri IMAU80233增殖培养基成分进行快速筛选优化。确定静态培养基为:果糖50.78 g/L,大豆蛋白胨23.90 g/L,酵母粉 11.90 g/L,柠檬酸 1.59 g/L,柠檬酸钠 20.06 g/L,MnSO1·5H20 0.09 g/L,MgSO,·7H20 0.60 g/L,吐温-80 1.00 g/L,精氨酸0.50 g/L。利用优化后静态培养基进行单因素试验,确定L.buchneri IMAU80233最佳静态培养条件:培养温度37℃,初始pH值6.5,接种量70%。优化后L.buchneri IMAU80233菌体增殖最大比生长速率达0.43 h-1,培养20 h后活菌数可达1.13× 109 CFU/mL,较MRS活菌数提高5.4倍。(3)采用5LX3联发酵罐进行小试试验,确定发酵培养基果糖含量为80.00 g/L,确定发酵最佳条件为:中和剂选取质量分数为25%氨水、恒pH值5.9、氮气保压至发酵终点。优化后发酵液活菌数达3.81 × 109 CFU/mL,较MRS培养基内活菌数提高18.3倍。本研究对L.buchneri IMAU80233发酵工艺进行优化,得到低成本、高活菌数的制备工艺,为开发L.buchneri IMAU80233的微生态制剂提供理论指导。