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鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)US10基因编码病毒的皮层蛋白,我们通过构建DPV CHv株的US10基因缺失株(DPV CHv-BAC-G-ΔUS10)及回复株(DPV CHv-BAC-G-US10FRT)来研究其功能,主要结果如下:1.鸭瘟病毒US10基因缺失株及回复株重组病毒的构建利用基于细菌人工染色体的反向遗传技术构建US10基因缺失的重组病毒DPV CHv-BAC-G-ΔUS10和回复重组病毒DPV CHv-BAC-G-US10FRT。经PCR鉴定、测序鉴定和Western blot试验证明US10缺失和回复突变成功。2.DPV US10基因缺失重组病毒在DEF细胞上的增殖特性(1)多步生长曲线结果表明:(1)病毒滴度:感染后48 h,DPV CHv-BAC-G及DPV CHv-BAC-G-US10FRT的病毒滴度分别为106.3和106.18 TCID50/0.1mL,DPV CHv-BAC-G-ΔUS10的病毒滴度为104.39 TCID50/0.1mL,相比前两者降低了近100倍。(2)病毒拷贝数:感染后48 h,DPV CHv-BAC-G及DPV CHv-BAC-G-US10FRT的病毒拷贝数分别为107.73和107.28 copies/0.1mL,DPV CHv-BAC-G-ΔUS10的病毒滴度为106.91copies/0.1mL,比前两者仅低近4倍。(2)一步生长曲线设置4个试验组:A组为DPV CHv-BAC-G感染组,B组为DPV CHv-BAC-G-ΔUS10感染组,C组为DPV CHv-BAC-G-US10FRT感染组,D组为DPV CHv-BAC-G-ΔUS10感染表达US10真核蛋白试验组。结果表明,感染后24 h,(1)病毒滴度:A、B、C和D组病毒滴度分别为106.17、104.70、105.72和105.03.03 TCID50/0.1mL。(2)病毒拷贝数:A、B、C和D组病毒拷贝数分别为108.20、107.77、107.67和108.06 copies/0.1mL。说明US10的缺失并未影响病毒基因组复制,而降低了病毒滴度在DEF细胞上的滴度。3.US10基因对于病毒在细胞间传递的影响噬斑试验结果表明,两株病毒感染后形成的噬斑大小相似,经统计学分析后没有显著性差异,说明US10的缺失对于病毒在细胞间横向传递的能力没有影响。4.DPV US10基因缺失后对感染宿主细胞免疫相关基因转录的影响DPV CHv-BAC-G和DPV CHv-BAC-ΔUS10各以MOI=2的剂量感染DEF细胞,并设置空白DEF细胞对照。结果表明,在病毒感染后,US10缺失株感染组细胞的IL-4、IL-6、IL-10、IFN-λ、Mx和OASL转录水平相比亲本株组显著上调,而TLR3转录水平显著下调。