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背景:TOM7(translocase outer mitochondrial membrane 7)是蛋白转位酶线粒体外膜(TOM)复合物的组成部分。TOM复合物是细胞存活所必需的,定位于线粒体外膜,是线粒体的门户,几乎所有被转运至线粒体各部位的前体蛋白都必须先通TOM复合物。已有的研究表明TOM7可影响TOM复合物与TOM受体的相互作用,从而干预蛋白插入外膜,但在脑缺血损伤中的作用尚未见报道。研究发现PINK1(PTEN-induced novel kinase,PINK1)介导的自噬在脑缺血中具有保护作用。目的:探讨TOM7是否通过调控PINK1/Beclin-1信号通路调节自噬从而影响SD大鼠脑缺血损伤。方法:(1)运用光化学栓塞法建立大鼠局部缺血性卒中模型(photothrombotic cerebral ischemic model,PT)。于术后1d,3d,5d,7d心脏灌注断头处死并提取脑组织蛋白,应用Western blot方法检测TOM7的表达时间窗。(2)构建化学合成的三条特异性TOM7 siRNA(si-TOM7-1,si-TOM7-2,si-TOM7-3),一条对照siRNA(scramble siRNA),应用Western blot方法检测其干扰效率,并筛选出其中最有效的TOM7 siRNA干扰片段。(3)观察干扰TOM7基因后,对大鼠光化学栓塞脑缺血模型后神经功能的影响、脑梗死体积和脑组织形态学的影响,评价干扰TOM7基因对SD大鼠脑缺血损伤的影响。(4)观察TOM7基因敲低对大鼠脑缺血后对自噬小体和自噬相关蛋白Beclin-1,p62和LC3表达的影响。(5)建立TOM7基因干扰的PINK1激动的大鼠脑缺血模型,PINK1重组蛋白于建模前24h注射。Western blot检测下游自噬相关蛋白Beclin-1、p62和LC3的表达。结果:(1)脑缺血后,TOM7逐渐增加,3d达到高峰,随后逐渐下降。(2)与PT组相比,对照siRNA没有干扰效果,在三条特异性片段中,TOM7-3具有最佳的干扰效果。(3)与PT组相比,干扰TOM7后,神经功能学评分明显增加,脑梗死体积明显增大,神经细胞损伤加重。(4)脑缺血后,干扰TOM7,自噬小体减少,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ比值表达下降,p62表达增加。(5)与TOM7 siRNA组相比,在TOM7干扰的基础上应用PINK1重组蛋白后,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达增加,且p62的表达降低。结论:(1)干扰TOM7可加重脑缺血损伤,提示TOM7具有一定的神经保护作用。(2)TOM7沉默后加重脑缺血损伤的机制可能是通过抑制PINK1/Beclin-1信号通路,从而抑制自噬,加重脑缺血损伤。