【摘 要】
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合成两段寡核苷酸,分别长38nt和12nt,38nt片段含有一个5NNSCGCNNSNNSNNSNNS随机序列.以12nt片段为引物,补平38nt手段,然后用BamHI和HindⅢ将其双酶切成插入片段连接到噬菌粒
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合成两段寡核苷酸,分别长38nt和12nt,38nt片段含有一个5NNSCGCNNSNNSNNSNNS随机序列.以12nt片段为引物,补平38nt手段,然后用BamHI和HindⅢ将其双酶切成插入片段连接到噬菌粒载体pComb3上.电转化重组噬菌粒到缩主菌XL1-Blue,直接用梯度稀释法测得转化库容量为1.2×10<7>.用限制性内切酶酶切重组噬菌粒验证了外源DNA片段已经完成插入载体,用辅助噬菌体VCSM 13超感染该转化菌库得噬菌体展示随机多肽库.用凝血酶为筛选标靶对该重组噬体库进行了三轮亲和筛选.以VCSM 13为抗原免疫家兔,得到ELISA效价为10<5>数量级的抗血清.用酶联免疫吸附分子法检测筛选过程得到的三个重组噬菌体库,发现重组噬菌体库与凝血酶的亲和力有一定的提高.说明多肽库中针对凝血酶的类底物多肽抑制剂得到了富集,为进一步进行单克隆筛选奠定了基础.另外,SDS-PAGE发现重组噬菌体的外壳蛋白g8p数量比之辅助噬菌体显著减少;噬菌体外壳上似乎大量附带一种宿主菌编码的蛋白.
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