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第一部分 TWEAK激活狼疮性肾炎中Ⅰ型干扰素信号通路目的:大量研究证实I型干扰素（IFN）在SLE发病中起关键作用。Ⅰ型IFN诱导基因标签已被用于SLE患者的分类,高Ⅰ型IFN诱导基因标签的患者预后往往不佳。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子（TWEAK）最初被描述为凋亡诱导因子,现已被证明与狼疮性肾炎（LN）的致病有关。因此,本研究拟明确TWEAK是否能诱导LN中Ⅰ型IFN途径的激活。方法:我们以LN动物模型MRL/lpr小鼠和LN患者来源的外周血单个核细胞（PBMCs）为体内、外研究对象。体内采用shRNA抑制MRL/lpr小鼠TWEAK基因的表达,体外采用TWEA siRNA或TWEAK蛋白干预PBMCs。苏木精-伊红染色、Periodic acid-Schiff染色、Masson染色评估小鼠肾脏病理改变,酶联免疫吸附试验检测肾脏间质液中IFNα浓度,实时定量PCR检测I型IFN诱导基因LY6E（lymphocyte antigen 6 complex locus E）、OASL（2’,5’-oligoadenylate synthetase-like）和 ISG15（IFNα-inducible protein（clone IFI-15K））的表达,western blotting 检测 LY6E 蛋白。结果:MRL/lpr小鼠表现出严重的肾小球肾炎组织学改变,包括肾小球细胞增生、PAS阳性物质和胶原纤维沉积,血清肌酐、血尿素氮和尿蛋白水平也明显高于MRL/MpJ小鼠（阴性对照）。而且,MRL/lpr小鼠肾脏间质液IFNα浓度及肾脏组织LY6E、OASL、ISG15的基因表达水平均明显升高;western blotting结果显示,与MRL/MpJ小鼠相比,MRL/lpr小鼠肾脏组织LY6E蛋白水平升高。TWEAK shRNA干预后明显减轻了 MRL/lpr小鼠的肾脏组织病理改变,降低了血清肌酐、血尿素氮和蛋白尿水平,同时下调了肾脏间质液IFNα浓度及肾脏组织LY6E、OASL、ISG15的表达。在体外实验中,与control siRNA相比,TWEAK siRNA也显著降低了 PBMCs中I型IFN诱导基因LY6E、OASL和ISG15的表达,而TWEAK刺激显著上调了 LY6E、OASL和ISG15的基因表达。结论:我们的研究结果揭示了 TWEAK在LN发病过程中的一个新颖的作用,即可以调控Ⅰ型IFN信号通路的活化,TWEAK或许可以成为阻止LN患者肾脏损害的关键靶点。第二部分 TWEAK通过抑制狼疮性肾炎中肾小管上皮细胞PGC-1α的表达而加重肾脏间质纤维化目的:肾小管上皮细胞的脂质代谢缺陷在肾脏损伤中的作用已受到广泛关注。脂质代谢受到诸多因子的调控,如过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅激活因子-1α（PGC-1α）。PGC-1α作为转录调节因子,可辅助激活多种核内受体,调节下游靶基因的表达,如脂肪酸转位酶（FAT）、肉碱棕榈酰转移酶1（CPT1）、长链酰基脱氢酶（LCAD）、细胞色素氧化酶Ⅱ（COX Ⅱ）等。目前肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子（TWEAK）在狼疮性肾炎（LN）发病机制中的研究主要集中在炎症通路上。因此,本研究旨在明确TWEAK是否通过调节PGC-1α的表达和干预LN中的脂质代谢来促进肾脏间质纤维化的进展。方法:以MRL/lpr小鼠为体内研究对象,分组如下:MRL/lpr小鼠组、抗TWEAK抗体干预组、同型对照抗体干预组、抗TWEAK抗体+PGC-1α shRNA干预组、抗TWEAK抗体+Control shRNA干预组,以MRL/MpJ小鼠为阴性对照。体外采用重组人TWEAK蛋白和吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（PDTC）孵育人近端肾小管上皮细胞（HK2细胞）。气相色谱-质谱联用系统（GC-MS）测定肾脏组织44种游离脂肪酸,油红O染色检测肾脏组织甘油三酯的聚集,Masson染色和天狼猩红染色评估小鼠肾脏间质胶原纤维沉积,实时定量PCR检测和western blotting分别检测基因和蛋白表达,免疫组织化学法检测肾脏间质中I型胶原纤维和纤维连接蛋白表达,免疫荧光检测肾脏组织PGC-1α的分布。结果:MRL/lpr小鼠肾脏组织游离脂肪酸和甘油三酯含量高于MRL/MpJ小鼠;然而,用抗TWEAK抗体处理后,肾脏组织游离脂肪酸和甘油三酯含量降低。免疫组织化学染色显示,PGC-1α在MRL/MpJ小鼠肾小管中的表达明显高于肾小球。MRL/lpr小鼠肾脏组织中PGC-1α及其下游靶基因FAT、CPT1、LCAD、COX Ⅱ表达水平显著低于MRL/MpJ小鼠,但是用抗TWEAK抗体干预后,MRL/lpr小鼠肾脏组织PGC-1α及其下游靶基因水平明显升高。抗TWEAK抗体能有效减轻MRL/lpr小鼠肾脏间质纤维化,表现为胶原纤维沉积减少、Ⅰ型胶原纤维和纤维连接蛋白表达降低。然而,PGC-1α shRNA拮抗了抗TWEAK抗体对LN肾脏间质纤维化的治疗作用。在体外,重组人TWEAK蛋白以剂量和时间依赖性方式抑制了 HK2细胞中PGC-1α的表达,但是NF-κB信号通路抑制剂PDTC可抑制HK2细胞中重组人TWEAK蛋白介导的PGC-1α蛋白水平的下降。结论:我们的研究结果表明TWEAK可通过激活NF-κB信号通路抑制肾小管PGC-1α的表达,从而导致肾脏脂质代谢缺陷和肾脏间质纤维化的进展。上调肾小管PGC-1α表达以改善脂质代谢是抗TWEAK抗体治疗肾脏间质纤维化的机制之一。