食管癌具有高发病率和高死亡率的特点,在世界癌症排名中位居前十,已成为影响全球人类身体健康的恶性疾病之一。目前根据食管癌患者自身体质及患病的程度,其治疗手段主要有手术切除病变肿瘤部位、同步放化疗、手术联合新辅助化疗、生物治疗、靶向治疗等,但是治疗效果不佳,所以针对食管癌治疗药物的研发至关重要。已有研究发现,在逆转肿瘤细胞的多药耐药方面,大环内酯类药物发挥着关键的作用,并且该类药物在一定程度上对肿瘤细胞的生长存在抑制作用,另外该类药物还可以诱导细胞发生凋亡与自噬,但是具体的理论基础研究匮乏。因此本实验选择大环内酯类抗生素家族的多拉菌素(Doramectin,DOR),探究该药物是否可以通过诱导细胞凋亡进一步抑制食管癌细胞增殖。本研究主要是通过MTT实验和划痕实验,探究经过DOR处理后的细胞其增殖活力和迁移能力是否发生变化;分别通过倒置显微镜、透射电子显微镜,观察细胞经过DOR处理后形态的主要变化;流式细胞术检测细胞经过DOR处理后,凋亡率和不同周期DNA含量变化;Western blotting检测凋亡蛋白在经过不同浓度DOR处理的细胞中表达量的具体变化;建立动物模型,通过HE、TUNEL、免疫组织化学染色等实验,深入探讨DOR对食管癌细胞在体内增殖、凋亡的影响,为临床上食管癌的治疗寻找新型辅助药物提供充足的理论基础。研究结果如下:(1)用不同浓度的DOR分别处理Eca109、EC9706细胞,结果证明,随着药物剂量逐渐增加,两种细胞的增殖活力和迁移能力均呈现出下降趋势。(2)在倒置显微镜下观察到加药处理后的Eca109、EC9706细胞变圆、皱缩、逐渐稀疏,数量减少;在透射电镜下明显发现加药后细胞的体积减小,核仁固缩,出现了凋亡小体。(3)通过流式细胞术检测经DOR处理后Eca109细胞在不同时期的DNA含量变化,结果证明,随着药物剂量增加,细胞的G2/M期DNA含量明显提高(P<0.001)。(4)流式细胞术检测经过不同浓度的DOR处理后细胞的凋亡情况,结果表明,细胞的凋亡率随着药物剂量的增加出现较大幅度的递增(P<0.0001)。Western blotting实验检测细胞中凋亡蛋白表达情况,结果显示,Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平上升,此外Cytochrome-c、caspase-3、caspase-9蛋白表达均出现增加趋势。(5)在体内荷瘤裸鼠模型中,DOR抑制了Eca109细胞生长,而裸鼠体重无明显差异(P<0.05),加药组的肿瘤体积与湿重明显变小,差异性显著(P<0.01);TUNEL染色实验证明经过药物处理后,肿瘤组织中凋亡细胞数量明显增多。免疫组化的结果表明,药物处理组的组织中caspase-3与caspase-9的阳性表达量出现了明显增加的现象。综上所述,DOR可以抑制食管癌细胞的增殖、迁移,并将细胞周期阻滞在G2/M期。线粒体通路与caspase途径参与了细胞凋亡的整个过程。因此,DOR诱导食管癌细胞凋亡的理论基础研究对于临床治疗食管癌具有重大意义。