目的 1．研究2型糖尿病患者线粒体DNA中tRNALeU(UUR)基因区域内核苷酸位点多态性变异的发生情况。 2．探讨线粒体DNAtRNALeU(UUR)基因多态性与2型糖尿病主要临床指标的相关性。 3．研究线粒体DNAtRNALeU(UUR)基因A3243G突变在母系遗传糖尿病家系中的发生情况。 方法 1．随机收集无血缘关系的325例2型糖尿病患者和无DM家族史的191位糖耐量正常者的血液标本。 2．调查并收集A3243G突变患者的母系遗传糖尿病家系成员的血液标本。 3．提取血液标本的基因组DNA。 4．用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性(RCR-RFLP)技术针对线粒体基因突变热点：tRNAL~u(UUR)基因区域进行点突变筛选。 5．对PCR产物纯化后直接进行测序分析。 6．突变阳性样本经T-A克隆后对质粒再次进行测序验证。 7．同时，对异质性突变样本进行变性高效液相色谱(DHPLC)分析。 8．收集临床资料，并分析tRNALeU(UUR)的基因多态性与主要临床指标的相关性。 结果 1．线粒体DNAtRNALe“(UUR)基因的多态性研究中发现，在收集的325例2型糖尿病患者中有A3243G突变1例、T3253G突变1例、G3277A突变1例、T3290C突变10例、T3300C突变1例突变；在191例正常对照中，筛查到T3253C突变1例、T3290C突变2例。 2．在线粒体DNAtRNALeU(UUR)基因中筛查到的5个多态性位点分别的突变率在T2DM组和正常组中的差别无显著性意义；但所有被筛到位点的突变率总和在T2DM组中占4．31％，而正常对照中为1．05％，两组间有显著性差异(P<0．05)。T2DM组中有、无tRNALeU(UUR)基因突变患者的临床特征相比，两组之间FINS、P2INS、HDL-c的差别有显著性意义(P<0．05)；在糖尿病伴随症状中神经病变、高血压在两组之间差别有显著性意义(P<0．05)。在tRNALeU(uuR)基因突变患者有、无携带各个突变位点的临床资料分析中可以看出，与每个突变位点相关的临床表现有所不同。 3．针对发现的3243位点的l例突变，继续做家系调查，发现：该家系呈母系遗传。经分子生物学技术分析后得出，仅有先证者一人发现有3243突变，其他母系成员虽有典型的线粒体DM症状，却未检出该突变。 结论 1．线粒体tRNALeU(UUR)基因是一个具有高度多态性的区域，该基因在2型DM人群中的突变率高于正常人。在研究中发现的5个多态性位点中，3290位点的突变发生率相对较高。 2．在tRNAt~u(UUR)基因发现的5个多态性位点中A3243G、G3277A、T3290C突变已报道过；而T3253G、T3300C突变还未见报道。其中，A3243G突变为异质性突变，是目前国际上惟一公认的线粒体糖尿病致病点突变；G3277A、T3290C为多态性变异，而非致病性突变。而未见报道的T3253G、T3300C突变为异质性变异，在T2DM中的变异比率较低，二者与DM的关系还需要进一步研究。 3．线粒体tRNALeu(UUP,)基因糖尿病的临床症状是多种多样的。携带有不同突变位点患者的临床表现各不相同；即使携带有同一突变位点因个体的异质性不同也可能出现迥异的临床表现。 4．在对DM3303RA001F家系的分析中发现，仅先证者一人携带有A3243G突变，而其他有明显线粒体糖尿病症状的母系成员均未发现有此突变。原因可能是其他成员血液中A3243G突变比例较低，未达到检测的下限，也可能同时伴有其他突变位点的存在等等，还有待于进一步研究。