【摘 要】
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目的:喉癌Hep-2细胞中泛素特异性肽酶7(USP7)表达经慢病毒敲低后,课题组前期运用RNA-seq技术筛选出了一系列差异性表达基因。为了验证其中检出的原钙黏蛋白1(protocadherin 1,PCDH1)的表达改变,拟通过体外细胞实验、免疫组化法论证喉癌细胞、癌组织中PCDH1表达,以了解其在喉癌发病机制中的作用,探究PCDH1在两者中的表达差异,根据相关病理特征,明确其表达与患者临床病理
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目的:喉癌Hep-2细胞中泛素特异性肽酶7(USP7)表达经慢病毒敲低后,课题组前期运用RNA-seq技术筛选出了一系列差异性表达基因。为了验证其中检出的原钙黏蛋白1(protocadherin 1,PCDH1)的表达改变,拟通过体外细胞实验、免疫组化法论证喉癌细胞、癌组织中PCDH1表达,以了解其在喉癌发病机制中的作用,探究PCDH1在两者中的表达差异,根据相关病理特征,明确其表达与患者临床病理特征和总体生存率的关系。方法:1.利用课题组前期构建的USP7特异性序列的慢病毒载体,建立USP7基因表达降低的Hep-2喉癌细胞系模型,再通过RT-PCR和Western blot方法从基因、蛋白质水平检测PCDH1的表达。2.收集川北医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科2016年9月-2020年4月喉癌组织手术标本80例及对应癌旁组织标本49例,并统计患者相关临床资料,免疫组织化学法检测标本组织中PCDH1的表达情况,采用SPSS22.0统计学软件分析PCDH1与喉癌患者不同临床病理特征的关系。3.通过电话和门诊随访等方式随访得到72例患者预后情况。对患者预后与PCDH1表达、相关临床特征的相关性进行生存分析,并描绘生存曲线。结果:1.siRNA转染喉癌Hep-2细胞后,经验证实验组USP7 mRNA、蛋白表达均较低;RT-PCR、Western blot分别检测到USP7敲低后的喉癌细胞PCDH1 mRNA、蛋白表达明显上升。2.免疫组织化学染色法显示:PCDH1主要于细胞膜、细胞核表达,染色呈弥漫性点状,多呈棕黄色,阳性表达率在喉癌组织、癌旁组织中分别为57.50%、10.20;统计分析发现,喉癌组织中PCDH1阳性表达与患者的肿瘤临床分期和分化程度相关;通过单因素Log-Rank检验得出,喉癌患者的TNM分期、癌组织分化程度和PCDH1表达情况与预后有关(P<0.05),进一步采用Cox回归分析得出:TNM分期、PCDH1表达与患者预后相关(P<0.05)。结论:PCDH1的表达情况与喉癌患者的TNM临床分期、肿瘤分化程度相关。PCDH1的表达可能受USP7的负调节作用,这可能是影响喉癌患者预后的机制之一。
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