rhBMP-2生物学活性及其复合异种骨体内异位植入的成骨活性研究

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目的:① 研制具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料② 观察基因重组人骨形成蛋白-2和异种骨复合体的成骨活性及其量效关系③ 研究rhBMP-2在体内诱导成骨中Collagen Ⅰ、Ⅱ及碱性磷酸酶(ALP)的表达。方法:以基因重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)与去抗原部分脱钙牛松质骨载体(DBCB)复合,制成复合rhBMP-2的异种骨(rhBMP-2/DBCB)。动物实验Ⅰ:将6周龄雄性BALB/C小鼠144只,随机分成实验组A、B和对照组CⅠ、CⅡ,于实验A组小鼠右股部肌袋内植入rhBMP-2/DBCB1骨粒(含rhBMP-20.4mg),B组同样部位植入rhBMP-2/DBCB2骨粒(含rhBMP-20.1mg),对照组CⅠ单纯植入DBCB骨粒,对照组CⅡ单纯植入rhBMP-20.1mg,分别于术后7、14及21d取材,通过大体观察、X线影像学、组织学分析,ALP活性和钙含量测定,观察4组诱导成骨情况。动物实验Ⅱ:将含rhBMP-20.4mg的rhBMP-2/DBCB1复合体植入BALB/C小鼠的右股部肌袋内,于术后3、5、7、9、11、14、17和21d 8个时间点取材,用免疫组化法对新生骨组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原进行检测,对ALP活性进行定量分析。结果:① 实验A组术后7d在小鼠肌袋可诱导软骨生成,14d形成组织骨,21d改建成板层骨并有骨髓出现。实验B组术后7d可见肥大间充质细胞和少量软骨细胞形成,14d形成软骨及部分网织骨,21d可见散在软骨岛,有部分新生骨,无骨髓;B组软骨及骨形成的质和量均差于A组。对照组CⅠ、CⅡ于术后各时间点均未见有软骨及骨形成。② 实验A组和B组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组CⅠ、CⅡ,A组高于B组,具有统计学意义(P<0.05)。③ Ⅱ型胶原和成软骨、软骨细胞的出现相伴随;作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原、ALP在软骨形成期即有表达,但随着成骨细胞的出现,骨组织的形成,Ⅰ型胶原表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势。结论:① rhBMP-2/DBCB安徽医科大学硕士学位论文是高效诱导成骨材料,经处理的小牛松质骨是良好的缓释载体,提高了rhBMP一2的骨诱导能力。②复合rhBMP一2异种骨的成骨活性与rhBMP一2的含量成正比。③在体内诱导成骨中rhBMP一2促进了Col lagenl、n及ALP的表达。
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