干扰KIAA1429基因表达对胃癌细胞迁移能力的影响和机制探究

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目的:为了了解KIAA1429基因在患者胃癌组织与癌旁组织内蛋白及m RNA表达状况,对胃癌迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其影响胃癌迁移和侵袭能力的具体机制。方法:选择实时定量荧光PCR(Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)法与蛋白质印迹法(Western blot,WB)测定KIAA1429基因在胃癌病理和癌旁组织中m RNA及蛋白的表达状况。使用细胞培养技术来处理人胃癌MGC803和SGC7901细胞系,采取慢病毒感染的技术及腺病毒感染技术,构建KIAA1429干扰的胃癌细胞系。选用细胞划痕实验及Transwell迁移侵袭实验初步探究KIAA1429基因对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。通过RNA高通量测序,初步筛选出KIAA1429的靶基因,然后通过RNA结合蛋白免疫沉淀实验(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)、回复试验解析验证KIAA1429干涉靶基因影响于胃癌迁移与侵袭能力的具体分子机制。结果:KIAA1429基因在患者胃癌组织中是一种高表达的基因,相较于癌旁组织基因的表达,KIAA1429癌症组织内的蛋白与m RNA含量都偏高(P<0.05)。在Traswell迁移侵袭试验与划痕愈合试验中KIAA1429表达受干扰后,与对照组相比较,基因抑制令迁移与侵袭试验的穿膜细胞总个数显著降低,迁移的速率明显变弱(P<0.05)。抑制KIAA1429基因表达后,靶基因DDR2的m RNA和蛋白表达也相应降低。在RIP实验中,KIAA1429和输入总体中均明显观察到KIAA1429,而Ig G中没有。在回复实验中,转染DDR2质粒后,敲低KIAA1429基因的胃癌细胞受抑制的迁移和侵袭功能得到了明显恢复。结论:胃癌组织中高表达的KIAA1429基因,对胃癌细胞迁移与侵袭的能力,产生了一定的促进作用。KIAA1429可以直接结合靶基因DDR2,调控其m RNA机蛋白产生水平,进而干涉细胞的迁移与侵袭的生物学功能。这些实验的各种具体检测结论为以后解析KIAA1429干涉人胃癌细胞迁移和侵袭能力的机制提供一定的参考价值。
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