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目的:我们之前的研究表明,组蛋白去乙酰化酶2(Histone Deacetylase 2,HDAC2)在人舌癌病理标本中高表达,并且通过小鼠舌癌动物模型,筛选出63个与舌粘膜癌变相关的hub基因,其中HDAC2的MCC(Maximal cliquecentrality)评分最高,提示其可能是舌癌发生的关键基因。本研究的目的是验证HDAC2在舌鳞状细胞癌细胞系中的表达,并通过抑制其表达,分析HDAC2对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响,评估HDAC2在舌鳞状细胞癌中的作用。方法:表达干扰HDAC2序列的慢病毒载体,转染人Cal-27舌癌细胞系,得到HDAC2-shRNA-Cal-27 及 control-shRNA-Cal-27,荧光显微镜下观察转染效率,并经嘌呤霉素筛选,得到稳定转染的Cal-27细胞,经qRT-PCR及Western-blot检测出HDAC2在mRNA水平和蛋白水平的表达。通过CCK-8方法、平板克隆形成实验,划痕愈合实验及细胞侵袭实验,在抑制HDAC2表达后,检测舌癌Cal-27肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等变化情况。结果:1、构建出稳定转染HDAC2-shRNA的Cal-27细胞携带HDAC2-shRNA的慢病毒及携带control-shRNA的空载体慢病毒转染人Cal-27细胞系后,人Cal-27细胞形态没有明显的变化,细胞仍为纺锤形;转染后48h后荧光显微镜下可见到HDAC2-shRNA及control-shRNA组细胞显示出强荧光表达,表明转染成功;在用嘌呤霉素筛选转染成功的细胞一周后,由于没有嘌呤霉素抗性,未经处理的Cal-27细胞完全死亡,剩下的实验组及阳性对照组存活的细胞,即为筛选出的稳定低表达HDAC2的Cal-27细胞,及稳定表达无义序列的Cal-27细胞;QRT-PCR结果显示,与空白对照组相比,HDAC2-shRNA组Cal-27细胞HDAC2的mRNA表达量明显降低(P=0.0001),而control-shRNA组Cal-27细胞HDAC2的mRNA表达量降低不显著;Western-blot结果表明,与空白对照组相比,HDAC2-shRNA组及control-shRNA组Cal-27细胞HDAC2的蛋白表达量变化与mRNA的变化一致,即前者表达显著降低(P=0.0012),后者降低不明显。实验结果证实HDAC2干扰成功。2、抑制HDAC2的表达导致Cal-27细胞的生长增殖的抑制CCK-8结果显示与空白对照组的细胞相比,在HDAC2低表达的实验组中,Cal-27细胞第2天开始出现生长增殖变慢(P=0.038),第3天后增殖变慢更明显(P<0.0001);而阳性对照组细胞生长和增殖无显著差异(P>0.05)。克隆形成的实验结果与CCK-8实验的结果一致,与空白对照组相比,实验组Cal-27细胞克隆形成能力明显降低(P=0.0014);阳性对照组细胞克隆形成能力与空白对照组相比下降明显,差异有统计学意义(P=0.0024)。因此可以说明抑制,HDAC2的表达在体外可显著抑制Cal-27细胞的生长增殖。3、抑制HDAC2的表达导致舌癌Cal-27细胞侵袭的抑制.实验组抑制HDAC2表达的舌癌Cal-27细胞侵袭至Transwell小室膜下方的细胞数量与空白对照组相比显著减少(P<0.0001),而表达无义序列的阳性对照组Cal-27细胞侵袭至Transwell小室膜下方的细胞数量差异则无统计学意义(P=0.2244)。该结果提示,抑制HDAC2的表达导致Cal-27细胞的侵袭能力降低,而转染慢病毒空载体对Cal-27细胞的侵袭能力无影响,验证了 HDAC2基因在舌癌Cal-27细胞侵袭功能中有重要作用。而细胞划痕实验显示,与空白对照组相比,实验组细胞的愈合能力得到改善(P=0.0062),阳性对照组细胞的愈合能力也显著提高(P=0.0007),两者的愈合能力均得到提高。可以看出,HDAC2基因的抑制不能抑制舌鳞状细胞癌Cal-27细胞的迁移能力。结论:HDAC2在舌鳞癌细胞系中的表达明显升高,通过抑制HDAC2的表达可显著影响舌鳞癌细胞的增殖和侵袭,HDAC2可作为舌鳞癌诊断和治疗的候选靶基因。