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海洋的高压、高盐、缺氧和少光等生态环境,使得海洋生物通过独特的代谢途径,产生了对自身防御海和信息交流等具有重要意义的结构新颖和活性多样的次级代谢产物。已经发现,海绵、珊瑚等无脊椎动物表面及其内部孔隙附着大量共附生微生物,与宿主在漫长的进化过程中形成共同体,能够共同产生结构新颖的活性代谢产物。课题组围绕南海海绵及其共附生真菌开展化学成分及生物活性研究。从永兴岛海绵Callyspongia sp.和Haliclona sp.分别得到共附生真菌黑孢霉属Nigrospora sp.及曲霉属Aspergillus sclerotiorum。采用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备型高效液相等多种色谱分离技术对真菌发酵产物进行分离纯化,并通过核磁共振、高分辨质谱等多种现代波谱技术,结合文献NMR数据,鉴定化合物的结构。共分离得到16个化合物,分别为5个倍半萜类、2个聚酮类、1个生物碱类、4个麦角甾醇类化合物、2个环肽类化合物以及其他类型化合物2个。从海绵Callyspongia sp.共附生真菌Nigrospora sp.发酵液中共分离得到7个化合物:麦角甾-7,22-二烯-6β-甲氧基-3β,5α-二醇（A1）,punctaporonin D（A2）,punctaporonin E（A3）,punctaporonin F（A4）,desuccinoylpunctaporonin C（A5）,（22E,24R）-麦角甾-3β-羟基-5α,9α-环氧-7,22-二烯-6-酮（A6）,（20S,22E,24R）-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（A7）。化合物A5为新天然产物,化合物A2～A4和A6为首次分离自黑孢霉属（Nigrospora sp.）真菌中分离得到。从海绵Haliclona sp.共附生真菌Aspergillus sclerotiorum发酵液中共分离得到9个化合物:penicillic acid（B1）,glycerol monooleate（B2）,6β,14-dihydroxy-7α-methoxyconfertifolin（B3）,6-dihydro-6-hydroxy penicillic acid（B4）,perlolyrine（B5）,furan-2,5-diyldimethanol（B6）,sclerotides A（B7）,sclerotides B（B8）,（20S,22E,24R）-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇（B9）。化合物B3和B5为首次分离自曲霉属（Aspergillus sclerotiorum）真菌中分离得到。以人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Huh-7细胞和人肝癌Huh-7干细胞为实验细胞株,采用CCK8法,检测化合物A1～A4、A6、A7、B1、B4～B6的抗肿瘤活性测试。体外活性初步筛选结果显示,在浓度为50μmol/L时,化合物A1、B1和B5对HCT116细胞具有不同程度的抑制作用;在浓度为50μmol/L时,化合物A1、A7和B5对Huh-7细胞具有显著的抑制作用;在浓度为25μmol/L时,化合物B5对Huh-7干细胞具有中等程度的抑制作用。采用PD-1/PD-L1结合分析试剂盒,以Selleck S7911为阳性对照化合物,检测化合物A1～A4、A6、A7、B1、B4～B9的PD-1/PD-L1结合抑制活性。初步筛选结果显示,化合物A6和B9显示一定的PD-1/PD-L1结合抑制活性,其IC50值分别为22.5和17.9μmol/L。其它化合物均不显示抑制活性。从永兴岛海绵共附生黑孢霉属（Nigrospora sp.）真菌和共附生曲霉属（Aspergillus sclerotiorum）真菌中共分离得到16个化合物,化合物A5为新天然产物,化合物A2～A4和A6为首次从黑孢霉属（Nigrospora sp.）真菌中分离得到。化合物B3和B5为首次从曲霉属（Aspergillus sclerotiorum）真菌中分离得到。在体外活性测试中,11个化合物显示出不同程度的细胞毒活性和抑制PD-1/PD-L1结合抑制活性,其中,化合物A6和B9具有PD-1/PD-L1抑制活性,这是首次发现甾体化合物具有PD-1/PD-L1结合抑制活性;化合物B5具有肿瘤干细胞抑制活性。