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水稻是世界的主要粮食作物。非生物逆境伤害是影响水稻产量主要因素之一,耐/抗逆境基因的发掘已成为目前水稻遗传资源与品种改良研究的热点。随着植物分子生物学的发展,一些逆境应答基因已被相继分离并转入水稻中,并获得了提高抗逆性的转基因植株,为抗逆水稻品种的选育开辟新的途径。
植物在生长发育过程中经常遭受逆境胁迫的危害,植物胁迫信号转导途径一直是人们关注的焦点。在逆境胁迫条件下,植物本身能够感知和传导逆境信号,启动或解除胁迫相关基因的表达,进而激活相应的保护代谢途径。
热激蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是一类在生物界普遍存在的蛋白质,不仅在应激条件下高效表达,在正常状态的细胞中也广泛存在,参与一些重要的细胞生理活动。HSP90家族是一类分子量为90 kD左右的热激蛋白,它具有帮助蛋白质折叠,保持蛋白质结构完整,调节胞质蛋白亚群表达等功能。为了系统的研究OsHSP90的基因结构、表达特性以及功能等,本研究以OsHSP90为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统筛选其互作蛋白,对筛选出的新基因Os HSPBP进行功能分析,以探究OsHSP90可能的信号传递路径。研究结果简述如下:
1、运用酵母双杂交技术,以OsHSP90、为诱饵,利用PEG/ LiAc法转化酵母细胞,从水稻低温和干旱cDNA文库中筛选到未知功能蛋白OsHSPBP。
2、通过数据库比对分析Os HSPBP,该基因cDNA全长1321bp,编码区位于184bp-918bp,编码244个氨基酸残基,预测分子量约25.5 kD,等电点约为9.49。通过氨基酸同源性比较发现OsHSPBP与其他植物中的该蛋白具有较高相似性,与玉米(ACG33139相似性最高,为70.40%,且在tify与CCT2功能域区间相似性明显高于其它部分。
3、运用半定量RT-PCR和实时定量PCR分析Os HSPBP在低温、高温、干旱和高盐等胁迫下以及在水稻不同生理时期各组织中的表达情况,发现其在未经逆境胁迫处理时,有不同程度的表达;高温和高盐逆境下,表达量先升高后减低;低温和干旱逆境下,表达量都升高;在水稻不同生育期的节间、节、叶、叶鞘、枝、颖壳等组织中均有表达,属于非组织特异性表达基因。
4、构建OsHSPBP基因cDNA片段的正、反义表达载体,并以根癌农杆菌介导建立适合水稻的遗传转化体系,从而研究该基因的表达在水稻抗逆应答中的生理功能。同时,构建OsHSPBP-GFP转入1301载体中,对OsHSPBP进行亚细胞定位。