论文部分内容阅读
缺血性脑血管病严重的影响着人类生存质量,其治疗原则是及时恢复脑缺血区的血液灌注。然而,缺血后再灌注能进一步加重缺血所导致的功能障碍和结构破坏,这中现象即为脑缺血再灌注损伤。减轻缺血再灌注引起的脑组织损伤,并促进其恢复已成为当前治疗中风性疾病的重要研究方向。近年来研究表明,有许多中药对脑缺血再灌注损伤有较好的保护作用,其机制主要为清除自由基,减轻细胞钙超载以及兴奋性氨基酸的毒性,抑制炎性反应等各方面。本研究是以活血祛瘀,通脉活络方药—血塞通注射液为基础,从细胞,分子,基因水平深入的探讨中医药对拟缺血再灌注损伤的保护作用,这为深入研究中医药的作用机制提供了实验依据。本论文包括四部分：(1)血塞通注射液对SH-SY5Y的无毒范围：用MTT法测定血塞通注射液对SH-SY5Y细胞的无毒范围,在无毒范围内按一定的比例递增选择药物浓度。(2)血塞通注射液对SH-SY5Y细胞缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用：在SH-SY5Y拟缺血再灌注损伤模型上,观察血塞通注射液抗损伤的作用。(3)血塞通注射液对缺糖缺氧再灌注损伤后SH-SY5Y细胞NogoA mRNA表达的影响：用实时荧光定量PCR的方法检测NogoA mRNA的表达,在基因水平上说明血塞通的作用机制。(4)血塞通注射液对缺糖缺氧再灌注损伤后SH-SY5Y细胞NogoA蛋白及其受体表达的影响：从细胞、蛋白水平,在SH-SY5Y拟缺血再灌注损伤模型的基础上,阐明血塞通注射液发挥作用的机制。在SH-SY5Y细胞缺糖缺氧再灌注损伤NogoA蛋白及其受体表达的实验中,实验分为八组：正常对照组(Control)、缺糖缺氧再灌注组(0GD/R) 0GD/R+NogoA抗体组、0GD/R+NogoA抗体+血塞通组(分为320mg/L和640mg/L两个剂量组)、OGD/R+NogoR抗体组、0GD/R+NogoR抗体+血塞通组(分为320mg/L和640mg/L两个剂量组)、OGD/R+P75抗体组、0GD/R+P75抗体+血塞通组(分为320mg/L和640mg/L两个剂量组)。用图像分析系统对相关指标进行定量分析。主要实验结果如下：1.血塞通注射液干预SH-SY5Y细胞24h、48h、72h后确定320mg/L,640mg/L浓度具有较好的促增殖作用,作为本实验的给药浓度2.SH-SY5Y细胞在缺糖缺氧3h,复糖复氧24h时,活性显著降低(P<0.01)血塞通注射液的高低两浓度对SH-SY5Y缺糖缺氧再灌注损伤具有保护作用(P<0.01),且高浓度保护作用强于低浓度。3.实时荧光定量法测定NogoA mRNA在OGD/R后表达显著增高(P<0.01),给予NogoA抗体及血塞通后,NogoA mRNA表达较0GD/R降低(P<0.01)。4.SH-SY5Y在0GD/R后,NogoA蛋白及其受体NogoR、P75表达显著增高(P<0.01),给予相应的抗体及血塞通干预后,表达均下降(P<0.01)。结论：本实验采用的SH-SY5Y细胞株,使用三气培养箱制作缺糖缺氧模型,实验结果稳定可靠。研究表明血塞通注射液对SH-SY5Y细胞拟缺糖缺氧再灌注损伤有一定的保护作用,其作用的机制可能为：抑制NogoA蛋白及其受体NogoR、P75的表达；同时还能降低NogoA mRNA的表达。