和厚朴酚对人鼻咽癌细胞生长及放射敏感性影响的研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ecnuzk2010
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目的:探讨和厚朴酚(Honokiol,HK)对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞生长及放射敏感性的影响及相关机制。   方法:选用人鼻咽癌高分化CNE-1和低分化CNE-2细胞系为研究对象。   (1)四氮唑盐比色法(MTT)检测和厚朴酚对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞存活率的影响;   (2)划痕愈合实验观察和厚朴酚对细胞迁徙能力的影响;   (3)磷脂酰丝氨酸外翻法(AnnexinV和PI双染法)检测和厚朴酚对细胞凋亡及坏死的影响;   (4)克隆形成法检测和厚朴酚对细胞的放射增敏作用;   (5)流式细胞术检测和厚朴酚联合X射线作用对细胞周期的影响;   (6)Westernblot法检测和厚朴酚作用对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响以及联合X射线作用对细胞周期调控相关蛋白CyclinBl、Cdc2的表达的影响。   结果   (1)和厚朴酚明显抑制CNE-1和CNE-2细胞生长,且存在着明显剂量和时间依赖性,IC50(半数抑制浓度)在CNE-1和CNE-2细胞分别为2.84和2.68μmol/L(24h),2.50和2.20μmol/L(48h);   (2)和厚朴酚能明显降低CNE-1和CNE-2细胞的迁徙能力;   (3)和厚朴酚诱导剂量依赖性的CNE-1细胞的凋亡和坏死,与对照组细胞相比2.5μmol/L和厚朴酚处理的CNE-1细胞的早期凋亡细胞由1.04±0.08上升到24.53±0.99,晚期凋亡细胞由0.06±0.03上升到23.05±4.87,坏死细胞由0.07±0.03上升到7.13±2.01,各组与对照组相比均有统计学差异(t=-41.17、-8.18和-6.08,P<0.01);   (4)在无明显细胞毒性剂量下,和厚朴酚24h预处理可以明显提高CNE-1和CNE-2细胞对X射线的放射敏感性,在CNE-1细胞,和厚朴酚+X射线照射组与单纯照射组相比,D0值1.09<1.54、Dq值1.17<1.59、SF2值0.38<0.57均变小,SER为1.41。而在CNE-2细胞更加明显,SER为1.88;   (5)3GyX射线照射明显增加两种细胞G2/M期细胞的比例(t=-14.96和-19.26,P<0.01),同时G0/G1期细胞比例明显减少(t=13.67和24.59,P<0.01)。和厚朴酚预处理则在不同程度上降低了照射诱导的G2/M期阻滞(t=7.65和4.98,P<0.01),同时增加了受照细胞S期细胞比例(t=-4.40和-15.03,P<0.05)。   (6)和厚朴酚明显增加促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达水平和降低抗调亡蛋白Bcl-2的表达水平。4μmol/L和3μmol/L的和厚朴酚分别使CNE-1细胞和CNE-2细胞中促调亡蛋白Bax和凋亡效应蛋白Caspase-3的表达水平出现2.31倍和1.89倍(t=-15.92和-17.15,P<0.01)及4.43倍和1.85倍(t=-29.39和-13.47,P<0.01)的增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达水平出现2.22和2.74倍(t=26.94和66.14,P<0.01)的降低。和厚朴酚降低了辐射导致的G2/M期细胞阻滞,并伴随CyclinB1蛋白表达明显的增加(t=-33.07和-73.49,P<0.01),但Cdc2蛋白的表达未见明显的变化。   结论   (1)和厚朴酚对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞的抑制率存在明显的时间效应和剂量效应关系,相同浓度的和厚朴酚对CNE-1和CNE-2细胞的抑制率不同,对CNE-2细胞的抑制更明显,CNE-2细胞对和厚朴酚更敏感;   (2)和厚朴酚能增加两种细胞的放射敏感性,但CNE-2细胞的辐射增敏比1.88大于CNE-1细胞的辐射增敏比1.41,说明和厚朴酚对CNE-2细胞放射增敏作用更明显;   (3)X射线照射可以引起两种细胞产生明显的G2/M期阻滞,和厚朴酚可以解除由于照射导致的G2/M期阻滞,同时伴有S期比例的明显上升,其机制可能是通过增加CyclinBl蛋白的表达水平来发挥其放射增敏作用的,但Cdc2蛋白的表达未见明显变化。和厚朴酚可以抑制由于照射所致的细胞DNA损伤的修复,促进细胞进入有丝分裂期导致细胞死亡;   (4)和厚朴酚促进CNE-1和CNE-2细胞的凋亡的重要机制可能是通过抑制抗调亡蛋白Bcl-2的表达,增加凋亡效应蛋白Caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表达来实现的。
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