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胎粪吸入性肺炎是新生儿的常见病,是窒息足月儿、尤其是过期产儿的主要死因之一,重者出现的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)类似ARDS的病理过程。上世纪末,外源性表面活性物质(Surfactant,Surf)替代或灌洗、一氧化氮吸入(inhaled nitric oxide,iNO)疗法的应用,对胎粪肺炎并发肺高压的治疗带来很大进展,临床疗效显著,使许多重症肺高压患者避免了体外膜肺(ECMO)的应用。但是,由于胎粪成分复杂,导致胎粪性ALI的病理生理变化复杂多样,故仍给临床治疗带来一定困难。研究表明肺中性粒细胞聚集、内源性肺表面活性物质失活及功能丧失、氧化-抗氧化失衡在ALI发病过程中起重要作用,其中,过氧亚硝酸盐(ONOO~-)可使Surf等关键蛋白硝基化而失活,参与多种原因诱导ALI的发病机制,硝基酪氨酸是反映体内ONOO~-含量的敏感、可靠指标,也是近年来的研究热点。关于前二者在胎粪诱导ALI中的作用已有较多文献报道。体外研究表明,胎粪具有直接刺激PMN“呼吸爆发”,产生大量氧自由基的作用,但关于胎粪诱导ALI的过氧化损伤机制及抗氧化剂干预作用尚缺乏研究。 超氧化物歧化酶(SOD)是经典的抗氧化剂。重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)气管内给药具有吸收快、半衰期相对较长、新生儿用药安全等特点,已有研究表明rhSOD可预防或减轻高氧或内毒素诱导的肺损伤,预防早产儿慢性肺疾病(chronic lung disease,CLD)的发生,增强iNO降低肺动脉压和改善氧合的作用。但至今,在国内外尚未见有rhSOD治疗胎粪肺损伤的报道。NO作为一种活性小分子,它的作用不仅仅局限于选择性扩张肺血管,它还有一定的抗炎作用,同时,还有潜在的过氧化损伤作用。因此,对于rhSOD早期干预能否减轻胎粪诱导ALI、干预时的合理剂量及其联合iNO的疗效是值得我们研究的课题。脚江大李褥份学世触丈 目前对rhSOD和Surf的药物相互作用研究较少,根据已有资料表明,rhSOD和Surf混合后没有改变rhSOD的活性,rhSOD对Surf活性的抑制作用很小,并随Surf磷脂浓度增加而消失,而且Surf可作为药物载体使其它药物气道内滴入后获得更为均匀的肺内分布,加快药物被上皮细胞吸收,延长气道内滴入的rhSOD蛋白清除时间。Wal七her等报道SoD一Surf脂质体气道内应用可减轻高氧诱导的早产兔肺损伤,但未见有关rhSOD联合Surf治疗胎粪诱导ALI的报道。 为此,本研究选用胎粪诱导幼鼠ALI模型,以单剂不同剂量rhSOD(5,10或20mg/kg)、联合20mg/kg rhSOD与20ppm NO吸入、或联合20mg/kg rhSOD与50 mg/kgSurf早期气管内给药干预,观察24h后肺内炎症指标、过氧化损伤指标、硝基酪氨酸形成的变化,以探讨它们在胎粪诱导ALI中的作用,旨在为临床该病及其并发症 的治疗和预防提供新的策略和思路。 第一部分rhSOD对胎粪诱导幼鼠急性肺损伤的抗炎及抗氧化作用研究目的: 探讨不同剂量(5,10或20mg/kg)rhSOD对实验性胎粪诱导ALI的炎症及过氧化损伤的影响。方法:1.动物及分组健康雄性幼年SD大鼠48只,体重130一1709,随机分为6组,每 组各8只,气管切开插管,经气道分别注入生理盐水、20%胎粪生理盐水混悬液或 rhSOD,具体分组如下: (1)正常对照组(normal,N):lml/kg一生理盐水 (2)胎粪模型组(meeonium,Mee):lml/kg胎粪 (3)胎粪+生理盐水对照组(Mee/saline):(2)+lml/kg生理盐水 (4)胎粪+rhSOD smg/kg组(Mee/rhSOD 5 mg/kg):(2)+5 mg/ml/kg rhSOD (5)胎粪+r hSOD10mg/kg组(Mee/rhSOD 10mg/kg):(2)+10mg/m1/kg rhSOD (6)胎粪+rhSOD 20mg/kg组(Mee/rhSOD 20 mg/kg):(2)+20mg/ml/kg rhSOD2.所有动物均在术后1一1.5h拔管,缝合气管、颈部肌肉和皮肤,等动物清醒后允 许正常活动和饮食。24h后处死,分别行大鼠支气管肺泡灌洗液(BAL)细胞计数 和蛋白含量、肺通透指数(BAL蛋白含量/血浆蛋白含量,pulmonary permibility index,PPI)、乳酸脱氢酶(LDH)含量测定,行肺匀浆髓过氧化物酶(MPO)、超葫左丈李博毖学夕触戈 氧化物歧化酶(,S OD)活性和丙二醛(MnA)、8一异前列腺烷(8一1 soprostane) 含量测定,观察光镜下动物肺损伤的程度并进行肺损伤病理评分。结果1.胎粪诱导肺损伤时各指标的变化 与N组比较,Me。组BAL细胞计数、蛋白含量、PPI、LDH及肺组织MPO活性、 MDA含量均显著增高(P均<0 .01),肺组织SOD活性无显著变化(尸>0 .05);光 镜观察发现,N组大鼠肺组织HE染色可见肺泡结构完整,肺泡壁无水肿,肺实质 无明显炎症细胞浸润;Mec组大鼠可见肺泡壁明显水肿、增厚,肺实质明显实变, 大量炎症细胞浸润,不同程度局灶性肺出血、肺水肿,肺泡腔有大量渗出物,包 括各种白细胞、血浆、纤维素,肺损伤病理评分明显高于N组,差异有显著性 (只0.01)。MeC与Mee/saline组之间比较,上述指标差异均无显著性(P均 >0 .05)。2.rhSOD对胎粪诱导肺损伤的影响(1)肺泡一毛细血管屏障通透性的变化:与Mec/saline比较,rhSOD各治疗组BAL蛋 白含量、PP工的变化不明显,差异均?