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水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的水痘病毒属。免疫抑制/缺陷患者、恶性肿瘤患者、孕产妇、新生儿等高危易感人群感染VZV后可能伴随严重的临床并发症,甚至死亡。目前尚无治疗VZV感染的特效药物。接种疫苗是一种有效的主动免疫防控策略,但VZV高危易感人群均不适宜接种疫苗。水痘-带状疱疹人免疫球蛋白（varicella-zoster immunoglobulin,VZIG）是由含高效价抗VZV中和抗体人血浆纯化制备的被动免疫制剂,VZV暴露后尽快输注/注射VZIG可有效预防高危易感人群病毒感染或减轻临床并发症。因此,VZIG对于此类人群的VZV暴露后预防具有不可替代的重要作用。国外已有多个产品上市,国内多家企业曾经/正在进行VZIG产品研发,但目前尚无产品上市。为推进VZIG产品研发,进一步完善产品质量控制体系,本研究在前期研究工作的基础上,建立了VZIG制品的抗VZV中和抗体效价检测方法与Fc生物学功能检测方法,并进行方法学评价与初步应用研究。具体研究内容如下:（1）基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价本研究室前期培养了VZV-Oka疫苗毒株在Vero E6细胞上的适应毒株并进行了系统鉴定,在此基础上,本研究建立了VZV-Oka-E6病毒库,测得的病毒滴度为6.55 lg TCID50/0.1 ml。通过优化VZV-Oka-E6病毒株的感染量及其感染细胞的固定液,建立了基于Vero E6细胞的抗VZV中和抗体检测抗膜抗原荧光抗体（fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA）试验。结果显示,以105.25TCID50/孔VZV-Oka-E6感染量在感染Vero E6细胞72 h时达到病变程度“++～+++”的标准;用-20℃预冷丙酮为固定液制备的感染细胞固定抗原片,可检测的VZV免疫球蛋白国际标准品最低效价为31.25 m IU/ml。基于以上优化结果,建立了基于Vero E6细胞的VZV中和抗体检测FAMA试验。本研究对建立的FAMA试验进行了方法学评价,包括灵敏度、特异性、重复性评价及其与微量细胞病变中和试验的相关性评价。结果显示,本研究建立的FAMA试验的灵敏度为31.25 m IU/ml;特异性评价结果表明,与单纯疱疹病毒1型、2型均没有交叉反应;使用同一批次和四批次制备的VZV-Oka-E6感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%。以上研究结果表明,本研究建立的基于Vero E6细胞的抗VZV中和抗体检测FAMA试验具有较高的灵敏度,良好的特异性与重复性。分别应用本研究建立的方法与微量细胞病变中和试验检测国内不同厂家不同批次的13份IVIG制品的抗VZV中和抗体效价。结果显示,应用本研究中建立的FAMA试验检测IVIG制品的抗VZV中和抗体效价范围为1:640～1:2560,几何平均值为1:1150.53;微量细胞病变中和试验检测IVIG制品的抗VZV中和抗体效价范围为1:18.87～1:75.18,几何平均值为1:33.72。将FAMA试验的检测结果与微量细胞病变中和试验的检测结果进行Spearman相关性分析,得到相关系数为0.587,说明本研究建立的FAMA试验与微量细胞病变中和试验具有良好的相关性。此外,我们用建立的FAMA试验对本研究室前期制备的3批次液体剂型与冻干剂型的VZIG小试制品与国内7份IVIG制品的抗VZV中和抗体效价进行了检测。结果显示,3批次液体剂型的VZIG小试制品的抗VZV中和抗体效价范围为1:1600～1:3200,几何平均值为1:2539.8;冻干剂型的VZIG小试制品的抗VZV中和抗体效价范围为1:6400～1:12800,几何平均值为1:10159.4。国内7份不同厂家不同批次IVIG制品的抗VZV中和抗体效价在1:640～1:2560范围内,几何平均值为1:1280。综上,本研究建立的基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验具有较高的灵敏度,良好的特异性与重复性,且与微量细胞病变中和试验有较好的相关性,可用于VZIG制品的抗VZV中和抗体效价的检测。（2）VZIG制品Fc段激活补体功能检测方法的建立与初步应用本研究参考2020版《中国药典》收录的人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法,首先对白喉类毒素国家标准品致敏红细胞的效价进行优化。结果显示,以10IU/ml效价的白喉类毒素国家标准品致敏红细胞获得的溶血反应动力学曲线呈“S”型,优于20 IU/ml与30 IU/ml效价的检测结果。按照优化的实验条件,本研究检测了本研究室前期制备的冻干剂型的VZIG小试制品的Fc段激活补体功能。结果显示,所测的VZIG小试制品均有针对白喉类毒素的Fc段激活补体活性,样品的活性指数分别为21.89%与46.69%,均低于参考品的60%。（3）VZIG制品Fc段结合受体能力检测方法的建立与初步应用本研究参考了Ramasamy I、Reipert BM等报道的基于流式细胞术的Fc段结合受体能力分析方法,以γ球蛋白为参考品,通过优化参考品的线性范围以及样品的最佳检测浓度,建立了Fc段结合受体能力检测方法。结果显示,参考品在0.125～15.625μg/ml的浓度范围内所得的拟合曲线R~2值在0.95以上,说明参考品在此浓度范围内具有良好的线性;IVIG样品的最佳检测浓度为0.5μg/ml。基于建立的方法,本研究检测了本研究室前期制备的3批次液体剂型与冻干剂型的VZIG小试制品与国内10批次IVIG制品的Fc段结合受体活性。结果显示,3批次液体剂型VZIG小试制品的Fc段结合受体功能指数范围在51%～82%之间,平均值为69%;冻干剂型VZIG小试制品的Fc段结合受体功能指数范围在76%～80%之间,平均值为78%。国内10批次IVIG制品的Fc段结合受体功能指数在128%～285%之间,平均值为201%。（4）VZIG制品抗体依赖的细胞介导的调理吞噬作用检测方法的建立与初步应用本研究参考Lee等报道的基于流式细胞术的抗体依赖的细胞介导的调理吞噬作用（antibody-dependent cell-mediated phagocytose assay,ADCP）分析方法,检测了本研究室前期制备的3批次冻干剂型的VZIG小试制品与国内10批次IVIG制品的ADCP效应。结果显示,VZIG小试制品与IVIG制品均有针对VZV抗体的ADCP效应,且效应强度与样品蛋白浓度相关。综上所述,本研究基于Vero E6细胞建立了水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验方法并进行系统的方法学评价,用于水痘-带状疱疹人免疫球蛋白中和抗体的检测。此外,为进一步补充和完善VZIG制品的质量评价体系,本研究还建立了Fc段激活补体功能检测方法、Fc段结合受体能力检测方法与抗体依赖的细胞介导的调理吞噬作用检测方法并进行初步应用研究。以上研究为水痘-带状疱疹人免疫球蛋白的制备提供了技术支持,为产品功能评估奠定了技术基础。