蒲公英活性成分菊苣酸抗骨关节炎作用机制及蒲公英挂面工艺的开发研究

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骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种以软骨退变和骨结构增生为特征的进行性疾病,其主要影响因素是衰老、年龄相关的线粒体功能障碍、氧化应激以及关节软骨细胞中炎症和分解代谢基因表达的相关变化。蒲公英作为全球范围内生长的菊科植物,长期以来一直被作为治疗草药,蒲公英具有抗炎、抗高血糖、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、肝脏保护和胃肠道保护等药理活性,传统用途有壮筋骨、乌虚发、清热解毒。菊苣酸是蒲公英中具有广泛有益生物活性的多酚类化合物,其对OA的发生和发展是否具有积极作用尚未见报道。本研究从细胞层面和动物层面探索蒲公英指标成分菊苣酸抗骨关节炎的药效和作用机制,分别构建肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的人源C28/I2软骨细胞和碘乙酸钠(MIA)诱发的大鼠OA模型;并以蒲公英为原料,优化配料比和工艺参数,开发出一款富含多种营养成分,具有特殊风味和食疗性功效的挂面。研究结果如下:1.本研究将MIA注射到大鼠膝关节腔内,建立体内OA模型,40只Sprague Dawley(SD)(4周龄)大鼠随机分为五组:空白对照组、OA模型组、菊苣酸治疗低剂量组(16mg/kg)、菊苣酸治疗高剂量组(32 mg/kg)和塞莱希布阳性药物组(2.86 mg/kg),造模成功后,大鼠开始连续28天的灌胃给药治疗。期间抽取各组大鼠关节腔滑液,对滑液中促炎症因子的分泌量进行测定,记录各组大鼠的关节肿胀度和体重变化;对大鼠膝关节软骨进行宏观观察,并对其切片进行H&E和番红O固绿染色,用以评估菊苣酸对大鼠关节软骨损伤的治疗效果。结果证实,菊苣酸确有延缓MIA导致的关节软骨被破坏的进程。2.本研究旨在评估菊苣酸对TNF-α诱导的人源软骨细胞C28/I2的药效和分子机制。采用CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法(western blot)从细胞活力、细胞凋亡、炎症反应和细胞外基质降解等方面研究TNF-α诱导的C28/I2细胞损伤。荧光显微镜观察C28/I2细胞内DCFH-DA的荧光强度,流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平。通过定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和western blot分析相关标志物和通路的基因和蛋白表达水平。结果表明,菊苣酸处理显着抑制一氧化氮(NO),前列腺素E2(PGE2),诱导型一氧化氮合酶(i NOS),环氧合酶-2(COX-2),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和白介素-12(IL-12)的过量产生。此外,菊苣酸通过上调Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的表达,下调ADAMTS-5和基质金属蛋白酶(MMPs),从而减弱TNF-α诱导的细胞外基质(ECM)降解作用。菊苣酸上调细胞内Bcl-2水平,下调Bax和ROS水平,通过激活Nrf2/HO-1途径来抑制TNF-α刺激的C28/I2细胞的凋亡。从机制上讲,菊苣酸通过抑制PI3K/AKT和NF-κB信号通路,促进Nrf-2/HO-1通路活化以限制NF-κB通路的激活来发挥抗骨关节炎作用。3.蒲公英挂面工艺的开发研究:以蒲公英为原料,将食盐和鸡蛋黄按照一定比例进行调配,调整面团熟化时间,结合感官评价,通过单因素及正交试验得到蒲公英挂面最佳配料比和工艺条件,并对蒲公英挂面部分理化指标进行检测,与普通挂面进行比较。结果表明,蒲公英挂面最佳配比为:蒲公英粉末占比1.5%,食盐用量占比为3%,鸡蛋黄含量占比2.5%,用25℃温水和面10 min,面团于室温下熟化20 min,将面团经面条机复合压延成为面带,切成2 mm宽,0.85 mm厚的面带,经烘烤制成颜色均匀,外表光滑的蒲公英挂面。在此配料比和工艺下制的的蒲公英挂面的弯曲断条率、熟断条率,蒸煮损失率均低于普通挂面,蒸煮吸水率高于普通挂面。
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