猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰弱综合征（Post weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原,自 1991 年于加拿大发生后,迅速蔓延到各养猪国家,成为目前危害世界养猪业的重要疫病之一。预防猪圆环病毒2型相关疾病的首选方法依然是疫苗预防,目前我国PCV2疫病防控以灭活疫苗和重组亚单位疫苗为主,PCV2灭活疫苗制造工艺中,甲醛是常用的灭活剂之一,灭活方式为0.2%甲醛溶液,37℃灭活24～60h,甲醛灭活过程破坏病毒蛋白结构,影响抗原免疫原性,灭活周期较长,同时残留甲醛易引起动物副反应。另外,国内兽用生物制品企业生产的PCV2灭活疫苗使用的佐剂则以进口矿物油佐剂为主,临床使用存在不良反应,并且制造成本较高。本研究通过PCV2灭活剂和免疫佐剂筛选,研制出一种新的水性佐剂PCV2灭活疫苗。具体研究内容如下:1.猪圆环病毒2型灭活工艺的优化取PCV2-SH株病毒液,分别选择不同浓度的甲醛溶液和β-丙内酯（BPL）溶液进行灭活,灭活后的PCV2接种已长成良好单层的PK15细胞,盲传3代,观察细胞病变（CPE）情况,采用间接免疫荧光IFA法检测感染细胞,比较两种灭活剂的灭活效果。结果为:0.15%甲醛溶液37℃灭活60h,0.2%甲醛溶液37℃灭活36h,采用0.1%、0.15%BPL4℃灭活18 h,均能灭活完全,BPL灭活对病毒抗原蛋白破坏较小。为进一步验证BPL灭活能力,取PCV2-SH株病毒液进行10倍浓缩,分别使用0.1%、0.15%BPL 4℃灭活24h,37℃水解2h,均能灭活完全。同时取车间生产的三批抗原进行灭活工艺验证,灭活条件为0.1%BPL 4～6℃灭活24h,37℃水解2h,三批生产抗原均灭活完全。另外,取BPL灭活后抗原与ISA206A佐剂按1:1体积比例混合进行乳化,制备灭活疫苗。取小鼠进行效力检验,分别免疫2次,间隔14天,首免后35天采集血清,测定PCV2 ELISA抗体,BPL组与甲醛组小鼠ELISA抗体平均滴度均≥1:2440,高于商品SH株参考苗抗体平均滴度1:1120,效力检验合格。上述数据表明BPL可以用于PCV2病毒的灭活,灭活条件为0.1%BPL4℃灭活24h,37℃水解2h。2.猪圆环病毒2型灭活疫苗水溶性免疫佐剂的研制以卡波姆为基础配制CP974S、CP934S、CP974M及CP四种新型水性佐剂。取PCV2灭活病毒液,分别加入CP974S、CP934S、CP974M和CP四种佐剂及ISA206、SMI3115佐剂,将抗原和佐剂按适当比例混合,制成PCV2灭活疫苗,进行小鼠和仔猪免疫试验。小鼠试验结果为:首免14天,小鼠经检测已产生ELISA抗体和中和抗体;首免35天,ISA206、CP974S、CP934S、CP974M、CP组的ELISA抗体平均滴度分别为 1:2080、1:3200、1:2720、1:760、1:300;中和抗体平均滴度分别为 1:48、1:32、1:28、1:24、1:10。仔猪试验结果为:首免14天,仔猪经检测已产生ELISA抗体和中和抗体。首免35天,ISA206、CP974S、CP934S、SMI3115、PCV2抗原组的ELISA抗体平均滴度分别为1:2240、1:3520、1:2880、1:1120、1:440,中和抗体为 1:52、1:56、1:45、1:36、1:10。试验结果表明CP974S和CP934S两种水性佐剂疫苗均能诱导小鼠和猪体产生较好免疫应答,其中,CP974S水佐剂灭活疫苗免疫效果优于进口油佐剂灭活疫苗,具有较好的免疫佐剂作用。上述结果表明,BPL可以用于PCV2病毒的灭活,CP974S佐剂对PCV2病毒具有较好的免疫佐剂作用,CP974S水佐剂制备的PCV2灭活疫苗接种仔猪无异常临床反应、能有效诱导猪体产生免疫应答。该研究结果可用于研发新的PCV2灭活疫苗。