目的蟾皮具有抗肿瘤和增强肿瘤患者免疫功能的双重作用且在临床已得到广泛证实,民间蟾皮外用早有报道,且疗效显著,本课题将蟾皮制成凝胶剂,对其处方前研究、处方筛选和制备工艺、质量标准及初步药效学进行系统的研究。方法处方前研究:选取活蟾蜍取皮分别采用冷冻干燥和常规烘干干燥技术,以含水量为指标,干燥分别得到干蟾皮和鲜蟾皮。干燥后蟾皮采用超微粉碎技术,使细胞破膜,加速其有效成分的溶出。比较干蟾皮和鲜蟾皮有效成分含量以及抗肿瘤活性,系统评价两者含量和药理作用。处方筛选和制备工艺:对凝胶剂成型高分子材料进行初步筛选,以外观、黏度、涂展性、均匀度为指标筛选凝胶剂成型辅料卡波普、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇和羧甲基纤维素钠的用量,同时采用单因素和正交试验以体外皮肤透过量为指标筛选出最佳透皮促进剂的种类和用量,确定最终处方。筛选处方加入顺序,确定优化后制备工艺。质量标准:制备三批蟾皮凝胶剂样品,对华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行薄层色谱定性鉴别;在制剂含量测定中,选择高效液相色谱法测量鲜蟾皮凝胶剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基;体外透皮试验考察三批样品24h累计透过量。初步稳定性研究:对三批蟾皮凝胶剂样品进行影响因素考察、加速稳定性考察。初步药效学研究:以小鼠的抑瘤率为指标,同时考察小鼠免疫系统的胸腺指数和脾脏指数。结果处方前研究结果表明:蟾皮冷冻干燥为冷冻干燥机中(温度:-50±5℃,压强:20±5Pa)连续干燥18h后含水量符合要求。冷冻干燥后鲜蟾皮和常规烘干后干蟾皮连续超微粉碎5min,细胞破膜率达98.43%和95.22%。比较两者含量测定结果显示鲜蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量按干燥品计算显著高于干蟾皮中含量,进一步药效学试验显示鲜蟾皮对S180腹水实体瘤荷瘤小鼠抑瘤率显著高于干蟾皮,故选择鲜蟾皮作为主药。处方筛选和制备工艺研究结果表明:最终确定蟾皮凝胶剂处方中各成分质量比为主药10%,成型基质HPMCK4M2%,HPMCK100M0.6%,透皮促进剂薄荷脑1%,氮酮3%,丙二醇1%,保湿剂甘油5%,防腐剂尼泊金甲酯0.1%,优化后处方制得凝胶剂外观均匀,黏度适中,涂展性好。质量标准研究结果表明:所得样品为半固体制剂,薄层色谱鉴别专属性强,采用高效液相色谱法对凝胶剂含量进行检测,色谱条件:色谱柱:kromasilC18(4.6mm×250mm,5μm)(瑞典);流动相:乙腈(A)-水(B)(48:52);流速:1mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:296nm。实验条件下,测得蟾皮凝胶剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量不低于380μg/g,该测定方法简便易行,精密度、重现性良好。初步稳定性研究表明:影响因素考察研究表明高温因素对制剂稳定性存在一定的影响,需要在低温环境密封储存。制剂在低温条件下放置三个月,各项检测指标与“0月”比较,未见明显变化。初步药效学研究表明:蟾皮凝胶对S180腹水型实体瘤小鼠抑瘤作用研究,通过比较各组小鼠给药后的肿瘤抑制率情况,表明抑瘤率与给药剂量呈现正相关性;与模型组相比,高剂量组与中剂量组均具有显著性差异。结论本文完成蟾皮凝胶剂制备工艺、质量标准、初步稳定性及初步药效学研究,为该制剂提供了可靠的质量控制方法,也为今后进一步开展药物作用机理及产业化研究奠定了坚实的理论基础。