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第一部分中药新复方制剂(HTCM)的筛选目的:探讨中药新复方制剂的不同有效成分对人肺癌、肝癌、乳腺癌及人正常肝细胞的增殖作用的影响。方法:课题组在中医药理论指导下,利用现代药学技术,制备出75%乙醇中药新复方制剂提取物RX-2(R1-2、R2-2、R3-2、R4-2、R5-2、R6-2、R7-2、R8-2、R9-2)和95%乙醇中药新复方制剂提取物RX-3(R1-3、R2-3、R3-3、R4-3、R5-3、R6-3、R7-3、R8-3、R9-3)。取对数生长期的A549、H460、Calu-1、SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、L02、MCF-7、T47D细胞,分别用不同浓度的RX-2、RX-3(终浓度分别为0.45mg/ml、0.3mg/ml、0.2mg/ml、0.13mg/ml、0.089mg/ml、0.059mg/ml)干预72h,采用MTT比色法检测RX-2、RX-3对9种细胞的增值影响。计算出各IC50值。数据采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:RX-2和RX-3分别对9种不同细胞株产生不同程度的抑制作用,且抑制率采用单因素方差分析和LSD-t检验,P<0.05,差异有统计学意义。其中,在RX-2中,肝癌SMMC-7721细胞对R4-2最敏感(其IC50值为0.077mg/ml),且R4-2作用于L02细胞的IC50值为0.176mg/ml;在RX-3中,肝癌SMMC-7721细胞对R2-3最敏感(其IC50值为0.037mg/ml),且R2-3作用于L02细胞的IC50值为0.168mg/ml。R2-3对SMMC-7721细胞增殖抑制作用更强,但两者对L02的毒性相差不大,故选择R2-3作为进一步实验的药物。结论:(1)中药新复方制剂RX-2、RX-3具有抑制A549、H460、Calu-1、SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、L02、MCF-7、T47D细胞的作用,且呈浓度依赖性。(2)R2-3对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用强,但对人正常肝细胞L02的毒性较低,故将其作为下一步实验的药物。第二部分R2-3对裸鼠SMMC-7721细胞皮下瘤的抗肿瘤活性目的:在肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下瘤模型上探索R2-3对皮下瘤生长的影响作用,以及其对裸鼠肝脏、肾脏功能的影响。方法:建立人肝癌SMMC-7721裸鼠皮下瘤模型,在接种后第7天,选取皮下瘤体积约50mm3的裸鼠,按实验方案随机分为4组。分别为对照组、低浓度组(100mg/kg每天给药)、中浓度组(200mg/kg每天给药)、高浓度组(400mg/kg隔天给药)。采用灌胃给药,共给药18天。每两天测量瘤径和瘤重,计算瘤体积(tumor volume,TV)、相对肿瘤体积(relative tumor volume,RTV)、相对肿瘤增殖率T/C(%),以检测对SMMC-7721裸鼠皮下瘤生长的影响。连续给药18天,次日将裸鼠断头取血,检测其肝肾功能;剥取瘤块,称重;并取肝、肾等脏器制成HE染色石蜡切片。数据采用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果:对照组中,随着肿瘤体积的逐渐增大,裸鼠活动量减少,饮食饮水无明显变化。给药18天后,对照组中裸鼠瘤块平均体积达202.67±39.55 mm3,瘤重为0.107±0.004 g。低浓度组中裸鼠瘤块平均体积达90.33±29.74 mm3,抑瘤率为73.56%;瘤重为0.035±0.007 g,抑瘤率为67.3%。中浓度组中裸鼠瘤块平均体积达54.33±6.03 mm3,抑瘤率为98.23%;瘤重为0.018±0.007g,抑瘤率为83.2%。高浓度组中裸鼠瘤块平均体积达70.33±30.11 mm3,抑瘤率为88.89%;瘤重为0.027±0.014 g,抑瘤率为74.8%。中浓度组与低浓度组相比,其抑瘤率明显升高。中浓度组与高浓度组相比,其抑瘤率升高。中浓度组、高浓度组在给药第10天后相对肿瘤增殖率即<60%,低浓度组在给药第12天后相对肿瘤增殖率即<60%。HE染色结果显示:对照组肝脏切片中可见大片炎症细胞浸润及肝细胞水肿,给药组中肝脏细胞未见特殊形态学改变;对照组和给药组的肾脏切片未见明显异常改变。对照组裸鼠血液中ALT、AST值(分别为2127 U/L、2766 U/L)明显高于低浓度组(分别为215.9 U/L、347.4 U/L)、中浓度组(分别为314.7 U/L、542.5U/L)、高浓度组(分别为137.4 U/L、398.5 U/L)。但在对照组和给药组中Urea、Crea值无明显差异。结论:(1)R2-3能明显抑制人肝癌细胞的增殖和裸鼠皮下瘤的生长,呈现出较好的剂量依赖关系,具有较强的体内外抗肿瘤活性;(2)总给药剂量相同时,每天给药比隔天给药的肿瘤生长抑制作用强;(3)R2-3在短期内对荷瘤裸鼠模型无肝肾功毒副作用,安全性较好。第三部分R2-3抗肝癌作用机制的初步探讨目的:初步探讨R2-3抗肝癌作用的机制。方法:取对数生长期的肝癌SMMC-7721、Bel-7402细胞及L02细胞,分别用不同浓度的R2-3(终浓度为0.12 mg/ml、0.09 mg/ml、0.06 mg/ml)干预72h,采用流式细胞仪(FCM)分析其抗肝癌作用与细胞周期及细胞凋亡的关系。结果:与阴性对照组比较,在R2-3作用于SMMC-7721细胞时G1期细胞较阴性对照组增多,且给药浓度越高,增高越多;S期、G2期细胞减少。但在Bel-7402组、L02组中G1期、S期、G2期的细胞与阴性对照组相比无明显差异。与阴性对照组比较,给药组凋亡率无明显差异。结论:推测R2-3抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用机制可能与阻滞其细胞周期于G1期有关;R2-3抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的作用机制可能与细胞周期及细胞凋亡无关;