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α-烯醇化酶基因(ENO1)是糖酵解过程中的一种代谢酶,催化2-磷酸甘油酸转化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但是尚未有研究报道ENO1在胃癌中的作用,因此其在胃癌中的具体功能和发挥作用的分子机制有待深入研究。目的检测ENO1基因在人胃癌组织及癌旁组织中的表达量,研究ENO1基因在胃癌发生发展中的重要生物学功能,并深入探讨其参与胃癌发生发展的机制。方法1.首先通过免疫组织化学染色检测ENO1在胃癌肿瘤组织及癌旁组织中的表达情况,并与TCGA数据库中的结果进行比较;应用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表达量与胃癌患者预后的相关性。2.应用RNA干扰技术靶向沉默胃癌细胞株ENO1基因的表达,通过CCK8实验、克隆形成实验、凋亡实验、细胞周期实验及划痕实验检测ENO1对胃癌细胞株生物学功能的影响。3.应用Affymetrix人类全基因表达谱芯片检测ENO1基因干扰前后胃癌细胞株MGC-803中全基因组mRNA表达丰度。应用Ingenuity通路分析差异表达基因,并寻找下游潜在的候选基因。使用qRT-PCR技术分别检测干扰ENO1后下游通路基因的mRNA表达水平的改变。结果1.ENO1在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,其在胃癌细胞中的表达水平高于正常胃上皮细胞。并且高表达ENO1的胃癌患者较低表达ENO1的胃癌患者生存率低。2.敲低ENO1可以显著抑制胃癌细胞的增殖和克隆形成能力,敲低ENO1可以诱导胃癌细胞发生凋亡,并且可以导致S期细胞周期阻滞,提示ENO1可能通过诱导细胞凋亡进而影响其增殖。同时,敲低ENO1之后可以显著抑制胃癌细胞的迁移能力。3.通过mRNA表达谱芯片检测发现,干扰ENO1可以导致下游681个基因的表达发生改变,并且IPA分析发现,敲低ENO1可以抑制HGF/PI3K/AKT/c-Fos信号通路的活性。进一步干扰ENO1可以上调MAP3K20 mRNA和DET1 mRNA的表达水平,并下调c-Fos mRNA和SBDS mRNA的表达水平。结论1.ENO1参与胃癌的发生发展,ENO1可能在胃癌中扮演“癌基因”的作用。2.ENO1可能通过HGF/PI3K/AKT/c-Fos信号轴促进胃癌细胞的增殖和迁移。3.ENO1有望成为胃癌潜在的诊断标志物,并为胃癌发生发展的机制探讨以及药物靶标的筛选提供理论依据。