猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的急性、高度接触性肠道传染病。其对两周龄以内的仔猪有极高的致死率,给养猪业带来极大的危害。现有的TGEV疫苗并不能产生理想的防治效果,因此以新方法防治猪传染性胃肠炎显得尤为重要。益生菌普遍存在于动物肠道中,有助于促进肠道蠕动、维持肠道稳态。目前研究表明多种益生菌可发挥抗病毒作用。本课题组前期成功分离并鉴定出一株植物乳杆菌,将其命名为LP-1,试验发现经该菌株上清（LP-1 supernatant,LP-1S）处理后,ST细胞能对TGEV感染产生明显的抑制作用。但LP-1S作用于猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）是否能抑制TGEV在该细胞内增殖,其具体机制目前尚无文献报道。本试验通过探究LP-1S作用于IPEC-J2细胞是否能对TGEV在该细胞内复制产生抑制效果,并进一步检测LP-1S处理后的IPEC-J2细胞感染TGEV不同时间点细胞诱导IFN-β水平,胞内STAT1磷酸化、p-STAT1核易位情况及部分ISGs转录及蛋白表达产生的影响,初步阐明LP-1S通过影响IPEC-J2细胞内JAK-STAT1信号通路发挥抗TGEV的作用机制。主要研究内容如下:1、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内TGEV的复制情况（1）MTT法检测发现1/4倍稀释LP-1S为作用IPEC-J2细胞的最大无毒剂量;利用Western-blot检测发现LP-1S在IPEC-J2细胞中抗TGEV效果具有浓度依赖性,最佳浓度剂量为1/4倍稀释。（2）1/4倍稀释的LP-1S作用于IPEC-J2细胞后感染TGEV GFP Miller（MOI=0.1）株,在不同时间点通过倒置荧光显微镜观察TGEV GFP Miller株的荧光强度,发现LP-1S预处理组荧光数目明显少于未处理组;TCID₅₀检测结果显示24h、48h LP-1S处理组较同时间点TGEV攻毒组均有极显著差异（P<0.01）。利用绝对荧光定量PCR、Western-blot分别检测IPEC-J2细胞中TGEV Miller N基因的病毒拷贝数和N蛋白的表达量,发现12h LP-1S预处理组较TGEV攻毒组N基因拷贝数有显著差异（0.01<P<0.05）,N蛋白表达水平无显著差异（0.05<P）;24h、48h两组N基因拷贝数及蛋白表达水平均有极显著差异（P<0.01）。2、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内IFN-β诱导情况、STAT1磷酸化水平及核易位情况将IPEC-J2细胞分为三组分别为植物乳杆菌上清预处理攻毒、攻毒组和空白对照组不同时间点收集细胞液上清,利用ELISA试剂盒检测不同组份细胞诱导IFN-β产生水平,结果发现不同时间段中植物乳杆菌上清预处理组诱导IPEC-J2细胞产生IFN–β水平较TGEV感染组均有极显著差异（P<0.01）。利用Western-blot技术检测三组不同时间点STAT1蛋白磷酸化水平发现,LP-1S处理组感染TGEV后期（24h⁴8h）STAT1磷酸化水平较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）。通过激光共聚焦显微镜发现,在12h LP-1S处理组感染TGEV后p-STAT1核易位水平较TGEV感染组有显著差异（0.01<P<0.05）,24h、48h LP-1S处理组感染TGEV较TGEV直接感染组p-STAT1核易位水平有极显著差异（P<0.01）。3、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内部分ISGs转录水平及ZAP、PKR蛋白表达情况按上述将IPEC-J2分为三组,利用相对荧光定量PCR检测不同时间点胞内部分ISGs基因的转录水平。结果发现这些基因在TGEV感染后24h-48h,LP-1S预处理组ISGs转录水平较TGEV攻毒组均有极显著差异（0.01<P<0.05）,其中两组Mx1、Mx2的转录水平在24h均达到最高值,PKR、ZAP、OASL、ISG15的基因转录水平与时间呈正相关,在48h达到峰值。Western-blot结果显示24h LP-1S处理后感染TGEV组胞内PKR蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）;ZAP蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有显著差异（0.01<P<0.05）,ZAP和PKR的蛋白表达结果同mRNA转录趋势一致;此外,两组p-PKR/PKR比值在不同时间点（24h、48h）均无显著差异（0.05<P）;24h LP-1S处理后攻毒组p-PKR/β-Tubulin比值显著高于TGEV攻毒组（0.01<P<0.05）,48h LP-1S处理后攻毒组p-PKR/β-Tubulin比值极显著高于TGEV攻毒组（0.01<P<0.05）。