论文部分内容阅读
目的通过研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)生物学特性的影响;探究其对血管生成的作用。并进一步探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对血管生成影响的相关机制。方法1.CCK-8法检测SAHA对HUVEC增殖能力的影响。2.流式细胞术检测15μM SAHA处理HUVEC48h后细胞周期的分布;Annexin-V/PI双染色法观察SAHA对HUVEC的凋亡情况的影响。3.Transwell小室法观察15μM SAHA处理HUVEC48h后其迁移能力的变化。4.基质胶体外成管实验观察15μM SAHA处理HUVEC48h后其在基质胶上形成管腔样结构的能力。5.Western-blot法检测15μM SAHA处理48h后HUVEC细胞中caspase级联反应相关蛋白、VEGF信号通路相关蛋白及P53、P21等蛋白表达的变化。6.基质胶体内血管生成实验观察小鼠体内基质胶栓中新生血管的数量从而检测SAHA对小鼠体内血管形成的影响。结果1.CCK-8检测结果显示:SAHA能够抑制HUVEC的增殖,抑制作用随着剂量的增大、时间的延长而增强。2.流式细胞术结果显示:15μM SAHA处理HUVEC48h后处于S期的细胞比例增加;Annexin-V/PI双染法结果显示SAHA处理后HUVEC细胞凋亡率明显增高。3.Transwell小室法结果显示,15μM SAHA处理HUVEC48h后,与对照组相比较,SAHA处理组迁移过膜的HUVEC细胞数明显降低。4.基质胶体外成管实验结果显示,15μM SAHA处理HUVEC48小时后,HUVEC形成的管腔样结构明显少于对照组。5.15μM SAHA处理HUVEC48h后,Western-blot结果显示,SAHA使HUVEC细胞中caspase级联反应中的活性蛋白增加,抑制VEGF相关信号通路,同时SAHA还使HUVEC细胞中P53和P21表达升高。6.基质胶体内成管实验结果显示,SAHA处理组小鼠体内的基质胶栓中新生的血管数明显少于对照组。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能够使HUVEC的细胞周期阻滞在S期并促进HUVEC凋亡的发生从而抑制HUVEC的增殖;同时抑制HUVEC迁移及体内外血管腔样结构的形成;SAHA对HUVEC在体外的增殖抑制作用及对体内外血管生成抑制的机制可能是SAHA阻断了VEGF相关的信号通路并且激活caspase级联反应以及P53和P21的表达。