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目的研究microRNA-10b基因在HepG2细胞中对促凋亡蛋白BIM和抗凋亡蛋白MCL-1的影响，分析microRNA-10b基因在肝癌细胞HepG2中是否有促增殖、抑凋亡作用，探讨该基因在肝细胞性肝癌增殖凋亡及基因治疗方面的意义。方法1、建立瞬时转染细胞：应用脂质体转染法将microRNA-10b正、反义重组真核表达载体瞬时转染人肝癌HepG2细胞。2、验证转染效率：通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miRNA-10b相对表达量。3、描绘细胞生长曲线并计算细胞倍增时间：运用细胞计数法描绘细胞生长曲线，并用TD=tlog2logNt-logN0公式计算细胞倍增时间。4、检测基因表达量：运用实时荧光定量PCR检测BIM及MCL-1的基因在转录后mRNA水平各实验组之间表达量的变化。5、检测蛋白表达量：通过Western-Blotting技术检测BIM及MCL-1蛋白在各组之间表达量的变化。6、MTT法：应用MTT法检测细胞生长情况，计算活细胞比率，比较各组细胞在转染后增殖能力变化。7、凋亡率检测：运用AnnexinV-PI流式细胞实验检测细胞凋亡率，并进行各组间比较。结果1、经瞬时转染后转染率约50%-60%，miRNA-10b在各组间表达量有统计学意义。2、描绘出HepG2细胞生长曲线，正义转染组的倍增时间最短，增殖能力明显增强；反义转染组倍增时间最长，增殖能力明显减弱。3、BIM基因在mRNA和蛋白水平的表达量与miRNA-10b的表达量呈负相关，而MCL-1基因则呈正相关，二者恰相反。4、运用MTT法检测，其中正义组活细胞数增多，细胞增殖加快，反义组活细胞数减少，细胞增殖减缓。5、流式细胞检测可见，反义组中细胞凋亡率最高，正义组凋亡率最低。结论1、miRNA-10b正、反义重组真核表达载体能有效调控HepG2细胞中miRNA-10b表达水平。2、miRNA-10b高表达可抑制HepG2细胞中BIM表达，进而促进MCL-1表达，使细胞凋亡失控后过度增殖。3、抑制miRNA-10b可减缓细胞增殖，促进其凋亡。