【摘 要】
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实验室之前从含有卡那霉素抗性基因的Ds插入突变体库中筛选到一株kan~+抗性分离比为1:1的突变体ovp1。该突变体的花粉粒表现为一半正常,一半败育。遗传学分析实验表明,ovp1为
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实验室之前从含有卡那霉素抗性基因的Ds插入突变体库中筛选到一株kan~+抗性分离比为1:1的突变体ovp1。该突变体的花粉粒表现为一半正常,一半败育。遗传学分析实验表明,ovp1为雌配子体正常、雄配子体完全致死突变体。分子生物学实验表明了ovp1中的Ds插入到拟南芥第二条染色体上,其5’端位于基因at2g01560起始密码子下游23bp,3’端位于基因at2g01913的TAA下游1284bp处。通过RFLP实验结果分析,突变体ovp1的Ds插入导致染色体大段缺失,缺失部分共271538bp含有40个基因。对缺失基因中所包含的大部分T-DNA插入突变体(26个基因共38个line)进行鉴定和表型观察,并未发现有雄配子体败育现象。同时鉴定并观察了Ds插入3’端上游基因at2g01913的等位突变体SAIL＿681＿B03。结果显示其具有花粉粒部分败育的表型。通过实时定量和半定量RT-PCR实验,发现基因at2g01913在ovp1和SAIL＿681＿B03中的表达量均有所下调,SAIL＿681＿B03是T-DNA插入纯合体且具有花粉败育表型(败育率为49.29%),杂合体SAIL＿681＿B03+/-同样具有花粉败育表型(败育率为23.87%),因此等位突变体SAIL＿681＿B03具有研究意义。我们对基因at2g01913进行了亚细胞定位实验,发现其编码的蛋白定位于细胞核和细胞膜上。与此同时,我们构建了at2g01913的全长基因互补载体并且已经获得转基因拟南芥植株,等待进一步实验来研究基因at2g01913与ovp1中雄配子体败育是否相关。
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