诸多研究结果表明:肝癌的发生和发展与线粒体有着密切的联系,而黄曲霉毒素B1(AFB1)又是诱导肝癌发生的最主要外界因素之一。AFB1不仅能使小鼠逐渐消瘦,引发肝脏组织癌变,还能诱导或是抑制肝脏部分蛋白的表达,idh3α蛋白是其差异蛋白之一。本研究制备的抗体可用于Western-blotting验证不同环境下哺乳动物细胞内IDH的表达水平,并通过亲和层析和免疫共沉淀等方法鉴定IDH的互作蛋白。本研究首先将idh3α构建到pET-32a上,并转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌中。通过IPTG诱导阳性菌,成功表达了IDH3α融合蛋白。并过Ni柱得到纯化的蛋白,纯化的蛋白用于免疫BALB/C实验小鼠,达到一定的效价后分别分离小鼠脾脏细胞制备单克隆抗体和提取脾脏RNA制备基因工程单链抗体。将免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,形成杂交瘤细胞,HAT培养液培养筛选,ELISA检测,阳性杂交瘤细胞克隆化3次,检测,筛选出一株能稳定分泌高亲和力、高特异性的单克隆抗体的细胞株,最后将抗体纯化和性质鉴定。从免疫后小鼠的RNA中,反转录并扩增单链抗体轻重连可变区基因片段,经灵活短肽连接,组装成单链抗体基因,再将此基因构建到噬菌体载体上,建立噬菌体单链抗体库,富集淘选,筛选出一株稳定的高亲和力、高特异性的重组子,然后进行可溶性表达,纯化,鉴定,即可制备出单链抗体。