氧化应激是自由基在体内产生的一种负面作用,是疾病发生发展的主要因素。现代畜牧业逐步向大规模、集约化方向发展,导致氧化应激成为畜禽养殖过程中必须要面对的问题。研发天然抗氧化活性成分,提高畜禽的抗氧化能力成为畜牧业的重点研究方向。刺五加中含有丰富的黄酮类化合物,具有显著的抗氧化活性,受到国内外研究学者的广泛关注。因此优化刺五加总黄酮提取工艺,并研究其抗氧化活性与作用机制具有十分重要的意义。刺五加总黄酮提取工艺优化。采用超声波辅助乙醇提取刺五加总黄酮,分析不同因素对总黄酮得率的影响,并设计响应面试验优化提取条件。结果表明,当乙醇浓度55%,提取时间73 min,液料比45:1 m L·g-1,提取温度72℃,提取功率300W时,总黄酮得率最高(24.11±0.17 mg·g-1)。刺五加总黄酮体外抗氧化能力评价。测定刺五加总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除能力以及总还原能力。结果表明,刺五加总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基清除能力的IC50值分别为28.38μg·m L-1、107.77μg·m L-1和228.70μg·m L-1,总还原能力与浓度呈正相关。刺五加总黄酮对RAW264.7细胞氧化应激的保护作用。试验通过H2O2刺激RAW264.7细胞建立氧化应激模型,探究刺五加总黄酮对ROS水平、MDA含量以及CAT、SOD、GPx活性的影响,并通过Western Blot检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白的表达水平。结果表明,刺五加总黄酮能够促进RAW264.7细胞的增殖,可以降低细胞内ROS水平以及MDA含量,提高CAT、SOD、GPx活性,同时能够对Keap1蛋白产生抑制作用,促进Nrf2蛋白转移至细胞核内,提高HO-1蛋白表达水平。刺五加总黄酮对C57BL/6小鼠溃疡性结肠炎的保护作用。试验通过连续7 d饮用2.5%葡聚糖硫酸钠诱导C57BL/6小鼠溃疡性结肠炎,初步探究刺五加总黄酮通过提高小鼠抗氧化活性抑制溃疡性结肠炎的作用机制。结果表明,刺五加总黄酮可以有效阻止结肠长度缩短与组织损伤,降低小鼠的疾病活动指数和组织病理学评分,能够提高结肠组织CAT、SOD、GPx活性,并降低MDA含量。试验对刺五加总黄酮提取工艺进行优化并得到最佳提取条件,提高了刺五加总黄酮得率,对保护刺五加资源具有重要意义;通过体外自由基清除试验证明刺五加总黄酮具有较强的体外抗氧化活性;刺五加总黄酮能够激活Nrf2/Keap1-HO-1信号通路,降低细胞内ROS水平并抑制脂质过氧化,对氧化应激状态下的巨噬细胞具有较强的保护作用;刺五加总黄酮能够通过提高动物体内抗氧化活性达到抑制溃疡性结肠炎的作用。体外和体内抗氧化试验对刺五加总黄酮相关产品的研发与应用具有一定的参考意义。