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研究背景:在泌尿系统恶性肿瘤中,肾细胞癌（Renal cell carcinoma,RCC）造成的死亡率位居第二位,每年新增病例超过40万例。在肾细胞癌病理中,占比例最高的是病理亚型是肾透明细胞癌（clear cell Renal Cell Carcinoma,ccRCC）,约占80%以上,是临床碰到的最常见的病理类型和治疗对象。近年来,多种诊断以及治疗手段的进步已经大大提高了包括肾透明细胞癌在内的肾细胞癌患者的诊断率和治愈率,并且显著提高了患者的生存期和生活质量。然而,还有很大一部分的患者在确诊肾透明细胞癌的时候已经发现肿瘤细胞转移到远处,失去手术治疗的时机,对患者远期预后产生不良影响。因此,进一步探索肾癌特别是肾透明细胞癌发病发展以及复发转移的潜在机制,寻找有效可靠的肾癌进展和治疗靶点的生物标志物具有重要意义。科学研究发现,DNA序列可转录为具有编码蛋白质功能的信使RNA（messenger RNA,mRNA）在人基因组中大约只有2%,但是转录为不具有编码蛋白质功能的RNA约有90%。我们把这90%的RNA称为非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）。lncRNAs（long no coding RNAs）是一类序列保守性低且长度超过200个碱基的一类ncRNA分子。随着基因组学发展,科研人员发现在各种恶性肿瘤组织和正常组织中lncRNAs表达具有明显差异,包括肾透明细胞癌,并且在恶性肿瘤的形成、浸润、转移等过程中均发挥重要功能,已成为新的潜在的肿瘤标志物。但是目前对肾透明细胞癌与lncRNA的关系临床研究较少,因此,本课题旨在探讨lncRNAs和肾透明细胞癌之间的关系,发现新的肾透明细胞癌的生物标志物,为诊治肾透明细胞癌探索新的方法和思路。研究目的:利用自主研发的lncRNAs芯片和RT-PCR技术从肾透明细胞癌患者肿瘤组织中筛选出表达异常的lncRNAs,利用数据库分析肾透明细胞癌患者的差异表达lncRNAs与患者生存期的关系,并对这些lncRNAs的功能和表达进行初步探索。研究方法:1.经同济大学附属上海市东方医院生物伦理委员会同意,我们前期收集在同济大学附属上海市东方医院泌尿外科进行的肾恶性肿瘤根治手术治疗患者的肿瘤组织和癌旁组织（即肿瘤外缘正常组织）,组织切片病理分析所取肿瘤的病理类型,选取肾透明细胞癌作为我们的研究对象。2.我们前期研究通过阅读大量文献选出具有肿瘤促进或者肿瘤抑制功能密切相关的长链非编码RNA（lncRNAs）特别是在其他肿瘤中有相关研究而在肾透明细胞癌中研究甚少的lncRNAs,查询这些lncRNAs的基因序列并设计合成引物,采用384微孔板,设计出一个用于筛选异常表达长链非编码RNA的高通量芯片板用于肿瘤和对应癌旁中差异表达的lncRNAs筛选。3.抽提肾透明细胞癌肿瘤组织及对应的癌旁组织RNA,检测RNA浓度和抽提质量,利用高通量lncRNA芯片板检测并对比肿瘤组织和癌旁组织中lncRNAs的表达差异水平,进行统计学分析,筛选肾透明细胞癌组织中差异表达lncRNAs。4.利用数据库分析肾透明细胞癌患者的肿瘤组织和癌旁组织中lncRNAs的表达差异水平同患者生存期的关系。5.利用慢病毒感染技术在肾透明细胞癌细胞系A498和SW839细胞中构建外源性高表达lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM的稳定细胞系,为后续采用体外细胞和体内小鼠荷瘤实验以及多种分子生物学手段研究lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM的功能做前期准备。研究结果:1.我们经过近两年的积累,收集了 35例肾恶性肿瘤组织和癌旁组织,并对这些组织进行固定包埋,切片染色后进行病理,发现34例为肾细胞癌,1例为肾盂尿路上皮癌。在肾细胞癌中31例为肾透明细胞癌,占肾细胞癌患者的85%,并根据染色结果进行病理分期。2.Real time PCR 结果显示 lncRNA BCYRN1 和 lncRNA CAHM 在肾透明细胞癌组织中表达明显高于癌旁组织。3.利用数据库分析显示肿瘤组织中lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM高表达的肾透明细胞癌患者生存预期差。4.在肾透明细胞癌细胞A498和SW839细胞系分别外源性高表达lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM,成功构建了稳定转染的细胞株用于后续实验研究。结论:1.我们收集的肾恶性肿瘤患者术后组织,肾透明细胞癌类型占肾细胞癌的80%以上,与其他研究的结果一致。2.lncRNAs芯片筛选到数个肾透明细胞癌患者肿瘤组织中表达异常的lncRNA。3.lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM在肾透明细胞癌患者肿瘤组织中表达明显高于癌旁组织,预后分析显示lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM高表达的肾透明细胞癌患者生存预期差。4.在肾细胞癌细胞中分别成功构建了 lncRNA BCYRN1和lncRNA CAHM外源性过表的稳定细胞株,过表达效率高,为后续研究提供了细胞学基础。