α-法尼烯是一种存在于生物体中的倍半萜类物质,已知与植物的抗冷性、昆虫的诱导及冷藏苹果和梨果实重大生理病害-虎皮病的发生有关,是苹果果实中重要的香气成分之一。α-法尼烯的生物合成是通过类异戊二烯途径中的甲羟戊酸途径,α-法尼烯合成酶是调控α-法尼烯合成的关键酶,催化FPP转变为α-法尼烯。本实验根据Genbank中注册的α-法尼烯合成酶基因全长序列设计特定引物,利用荧光定量PCR和Western杂交的方法,鉴定初步获得转基因植株,并研究了生理特性。主要结果如下:(1)构建了pBI-AFS反义和RNAi表达载体,并转化丰产梨,得到转AFS基因的丰产梨植株。(2)以丰产梨组培苗为材料,优化了丰产梨组培苗的生根及遗传转化体系,并成功将转基因组培苗驯化移栽。最适宜丰产梨继代的培养基为MS+BA1.0mg/L +IBA0.2mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L,生根培养基为1/2 MS+ IBA0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L.(3)转基因植株经过RT-PCR和荧光定量PCR分析表明,野生型中α-法尼烯合成酶基因的相对表达量最高,反义转化植株中有所降低,RNAi转化植株中α-法尼烯合成酶基因的相对表达量最低。(4)通过克隆青香蕉苹果的α-法尼烯合成酶基因(AFS)片段,构建pEASY E1-AFS-原核表达载体,转化大肠杆菌,制备抗体,进行了Western杂交分析,显示该基因在蛋白水平成功表达。(5)野生型丰产梨比转AFS基因丰产梨具有较高的耐热性,高温胁迫条件下野生型丰产梨维持较高的光合能力。