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目的:目前,男性不育是一种严重的医疗和社会问题,相当比例的男性不育症患者不能产生精子。随着分子生物学技术的广泛应用,与精子生成有关的基因逐渐成为当前研究的热点。对调控精子发生相关基因的深入研究,不仅有助于发现新的男性避孕方法,而且还为治疗男性不育症提供了重要的生物学依据。本课题通过研究Gldn基因在睾丸发育过程中的表达情况,探讨Gldn基因与精子发生可能存在的关联。 方法: (1)采用高通量的全基因组表达谱芯片技术筛选出大鼠睾丸差异表达显著基因Gldn。 (2)饲养2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日龄Wistar雄性大鼠。 (3)采用Real-time PCR技术检测不同日龄大鼠睾丸组织中Gldn基因mRNA的转录表达。 (4)采用Western blot技术检测不同日龄大鼠睾丸组织中Gldn蛋白的表达。 结果:在mRNA水平上,Gldn基因在大鼠出生后2-65天mRNA的表达模式:出生后第2天开始迅速上升,第4天达到最高值,然后开始下降,第14天降为较低值,第15天略微上升,第16天降为最低值,第16天后一直持续最低值至第20天,第25天到第65天的mRNA相对于第14天的mRNA几乎不表达。其中出生第4天的大鼠睾丸组织Gldn mRNA表达最高。在蛋白水平上,Gldn蛋白在不同日龄大鼠睾丸组织中均有表达。大鼠出生后2-65天Gldn蛋白表达模式呈波浪式:出生后第2天开始缓慢下降,第4天以后迅速上升,到第6天达到相对高值,然后开始下降,第10天降到相对低值;第10天后逐渐上升,上升到第15天达到相对高值,然后迅速下降,到第25天降到相对较低值;第25天之后逐渐上升,上升到第45天、50天达到最高值,又开始迅速下降,第65天降为最低值。其中第15、40、45、50日龄大鼠睾丸组织Gldn蛋白表达有显著增加,第45、50日龄大鼠睾丸组织蛋白表达最高。 结论: (1)Gldn基因mRNA在大鼠出生后第4天与第6天睾丸组织中相对表达最高,有可能参与精子发生中的有丝分裂和减数分裂过程,促进精原干细胞的增殖分化; (2)Gldn蛋白在大鼠睾丸发育过程中一直有表达,可能参与精原干细胞的增殖分化,减数分裂尤其是第一次减数分裂及精子成熟过程。