【摘 要】
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新城疫(Newcastle disease,ND)和马立克氏病(Marek’s disease,MD)是两种危害养禽业的重要病毒性传染病。本研究利用马立克氏病毒(MDV)Rispens CVI988疫苗毒株为载体,表达新
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新城疫(Newcastle disease,ND)和马立克氏病(Marek’s disease,MD)是两种危害养禽业的重要病毒性传染病。本研究利用马立克氏病毒(MDV)Rispens CVI988疫苗毒株为载体,表达新城疫病毒(NDV)基因Ⅶ型流行毒株ZJ1的融合蛋白(F),构建针对ND和MD的多价重组疫苗。以MDV Rispens CVI988毒株基因组短独特区的sorf 1和sorf 2基因作为插入位点,选择网状内皮增生症病毒(REV)基因组的长末端重复序列(LTR)作为启动子,构建含NDV ZJ1毒株F基因及报告基因(smGFP)的转移载体质粒pMDV/F/GFP。将MDV感染细胞的DNA和转移载体质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经同源重组获得重组病毒。再通过筛选和纯化,得到重组病毒rMDV-F/GFP。然后,用Cre重组酶去除重组病毒基因组中的报告基因,得到仅带LTR启动子和F基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-F。经PCR、间接免疫荧光(IFA)试验证明, F基因已正确插入到MDV基因组中并得以表达。在CEF上连续培养7代后获得的rMDV-F,经PCR和IFA试验证实,仍具有良好的遗传稳定性。我们还评价了重组病毒rMDV-F对ND和MD的实验室免疫保护效力。在第1批试验中,以3000PFU的rMDV-F免疫一组1日龄SPF鸡,以0.2ml /鸡的灭活苗免疫另一组7日龄SPF鸡,另设攻毒对照组和空白对照组;在21日龄用10LD50的NDV F48E8强毒株进行攻击,rMDV-F免疫组保护率为83.33%,灭活苗免疫组保护率为100%,攻毒对照组的鸡全部发病死亡,空白对照组的鸡全部存活。在第2批试验中,以3000PFU的rMDV-F免疫一组1日龄SPF鸡,以同样剂量的MDV Rispens CVI988毒株免疫另一组1日龄SPF鸡,另设攻毒对照组和空白对照组;在7日龄以500PFU的MDV RB1B超强毒株攻击,观察至90日龄,对所有试验鸡进行剖检和组织学检查;rMDV-F免疫组与MDV Rispens CVI988免疫组对MD的保护率均为100%,攻毒对照组鸡均发病,空白对照组的鸡全部存活。试验表明,重组病毒rMDV-F免疫鸡对NDV强毒攻击有一定的抵抗作用,而对MDV强毒攻击能产生足够的保护力。
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