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目的:利用FGL1慢病毒载体感染人肺腺癌吉非替尼耐药细胞靶向沉默纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)的表达,观察沉默纤维蛋白原样蛋白1(FGL1)对肺腺癌细胞吉非替尼敏感性及相关生物学行为的影响,并初步探索可能存在的机制。方法:(1)人肺腺癌吉非替尼敏感细胞株PC9和获得性耐药细胞株PC9/GR的培养及FGL1相对表达量的检测:培养PC9及PC9/GR细胞,q RT-PCR和Western Blot检测两株细胞中FGL1的相对表达量。(2)采用FGL1慢病毒载体(Lv-FGL1)感染PC9/GR细胞及验证FGL1表达情况:应用慢病毒载体感染PC9/GR细胞,设置未做任何处理的PC9/GR细胞为Control组,感染空载体的PC9/GR-Lv NC组、感染FGL1慢病毒载体的PC9/GR-Lv FGL1组,q RT-PCR和Western Blot检测各组细胞中FGL1表达水平的变化。(3)检测PC9、PC9/GR、PC9/GR-Lv NC及PC9/GR-Lv FGL1各组细胞的耐药性:采用CCK-8方法检测不同浓度的吉非替尼(0、0.008、0.04、0.2、1、5、10、20、40μmol/L)对PC9、PC9/GR、PC9/GR-Lv NC及PC9/GR-Lv FGL1各组细胞的增殖抑制情况并计算相应的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)。(4)设计实验分组及检测各组细胞克隆形成能力和凋亡率:实验设置以下五组:Control组、Lv NC组、Gefitinib组、Lv FGL1组及Gefitinib+Lv FGL1组,采用平板克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率的变化。(5)检测各组细胞中凋亡相关蛋白的表达情况:Western Blot检测上述各组细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved-Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)与吉非替尼敏感株PC9细胞相比,FGL1在吉非替尼耐药株PC9/GR细胞中呈高表达(P<0.01)。(2)慢病毒载体感染PC9/GR细胞的感染效率达80%以上,经过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,q RT-PCR和Western Blot检测结果均表明FGL1在PC9/GR-Lv FGL1细胞中稳定持续低表达(P<0.01)。(3)CCK8结果显示PC9/GR细胞与PC9细胞相比耐药性明显增高(P<0.001),且PC9/GR-Lv FGL1细胞的吉非替尼IC50明显低于PC9/GR-Lv NC及PC9/GR细胞(P<0.001)。(4)与Control组和Lv NC组比较,Gefitinib组、Lv FGL1组以及联合组克隆形成率均有不同程度降低(P<0.05),细胞凋亡率亦有不同程度升高(P<0.05),且均为联合组变化最为明显。Lv NC组与Control组比较,克隆形成率和细胞总凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。(5)与Control组和Lv NC组比较,Gefitinib组Bax、Bcl-2及Caspase-3表达无明显差异,而活化状态的Cleaved-Caspase-3表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默FGL1表达后,Bcl-2蛋白表达明显下调,Bax蛋白表达明显上调,且联合Gefitinib后其变化均最为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,无活性的Caspase-3蛋白在各组细胞中表达均无明显差异,而Cleaved-Caspase-3蛋白在FGL1低表达细胞中显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv NC组与Control组比较,各蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默FGL1基因可提高肺腺癌吉非替尼获得性耐药细胞对吉非替尼的敏感性,抑制耐药细胞的增殖和生长,并且促进耐药细胞的凋亡,可能与促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表达上调、抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调有关。