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目的:阐明中药活性成分血根碱（Sanguinarine,SAN）通过miRNAs转录后调控机制,在体内外抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的分子机制,为以miRNAs为靶点的胃癌治疗新药研发提供一定的实验基础。方法:1.采用CCK-8法检测不同浓度SAN对人胃癌细胞株BGC-823、人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞LS-180、人宫颈癌细胞Hela以及人肝癌细胞HepG-2 5种肿瘤细胞的增殖抑制作用,通过计算抑制率和IC50值,筛选出SAN敏感的肿瘤细胞株BGC-823,并在3种胃癌细胞株（MGC-803、BGC-823、SGC-7901）上进一步验证SAN体外抑制胃癌细胞增殖的作用。2.构建BGC-823细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予5-氟尿嘧啶（5-FU,50mg/kg）和不同剂量的SAN（2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg）,每隔两天腹腔注射给药一次,持续4周;采用HE染色等技术观察SAN对移植瘤体积、重量以及瘤组织病理形态的影响,观察SAN体内抑制BGC-823细胞增殖的作用。3.采用基因芯片技术对正常胃粘膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞BGC-823和SAN作用24h后BGC-823细胞中差异表达miRNAs和mRNAs进行高通量筛选,利用miRanda数据库对差异miRNAs进行靶基因预测,对关键差异mRNAs进行信号通路（pathway）富集分析。4.应用实时荧光定量RT-PCR技术在正常胃粘膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞BGC-823上对8种关键的差异miRNAs及其靶mRNAs的表达情况,以及差异基因在SAN作用前后的表达水平变化情况进行验证。5.应用免疫组织化学技术检测关键差异miRNAs miR-96-5p和miR-29c-3p的共同靶基因MAP4K4及其参与信号通路下游磷酸化MEK4和JNK1蛋白表达水平,初步研究SAN抑制BGC-823细胞增殖的分子机制。结果:1.SAN体外抑制肿瘤细胞增殖作用SAN作用24 h能够明显抑制5种人肿瘤细胞增殖,并呈浓度依赖关系,SAN对人胃癌细胞BGC-823的IC50明显低于其余4种肿瘤细胞;SAN作用24h和48h时对BGC-823细胞的IC50明显低于人胃癌细胞MGC-803和SGC-7901。2.SAN对BGC-823细胞裸鼠移植瘤的作用不同剂量（5 mg/kg和10 mg/kg）的SAN干预4周能够明显抑制胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性;SAN干预组肿瘤组织出现了不同程度的坏死和凋亡。3.SAN对BGC-823细胞miRNAs表达的影响及生物信息学分析与GES-1相比,BGC-823细胞中有291个miRNAs表达水平有显著差异,SAN作用24 h后BGC-823细胞中有包括miR-96-5p和miR-29c-3p等在内的224个miRNAs表达水平发生显著变化;MAP4K4等是miR-96-5p和miR-29c-3p的靶基因,生物信息学分析显示,差异mRNAs主要涉及Purine metabolism、Calcium、MAPK等信号通路。4.关键差异miRNAs的RT-PCR验证miR-96-5p和miR-29c-3p在BGC-823细胞中显著高表达,SAN作用后表达下调,与基因芯片结果一致;MAP4K4在BGC-823细胞中显著低表达,SAN作用后表达上调,与芯片检测结果一致,在胃癌中表现为抑癌基因的性质。5.SAN对裸鼠移植瘤组织中MAPK通路关键蛋白表达的影响SAN可显著升高MAP4K4、P-MEK4和P-JNK1蛋白的表达水平,与SAN的作用呈明显的剂量依赖关系。结论:本课题分别在细胞水平和动物水平观察了SAN对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用,从miRNAs角度探讨SAN抑制BGC-823细胞增殖的机制,研究结论总结如下:1.SAN可以在体外浓度依赖性抑制多种人肿瘤细胞增殖,对人胃癌BGC-823细胞相对最敏感,在体内外均可显著抑制BGC-823细胞增殖;2.SAN可能通过下调BGC-823细胞中miR-96-5p和miR-29c-3p的表达水平,解除对靶基因MAP4K4的靶向抑制作用,间接上调MAP4K4的表达水平;3.SAN可剂量依赖性上调裸鼠移植瘤组织中MAP4K4及其下游P-MEK4和P-JNK1蛋白的表达,激活MAPK信号通路发挥抗肿瘤作用。