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MicroRNAs(miRNAs)是一类新发现的内源性非编码单链小分子RNA,通常在转录后水平调控基因表达,广泛存在于真核生物中,参与细胞发育、凋亡、增殖、分化、代谢等多种重要生物学过程。研究表明异常表达的miRNAs与许多肿瘤的发生发展密切相关。miRNAs可作为癌基因或抑癌基因参与人类肿瘤形成的多条信号通路。其中,宫颈癌中存在miRNAs的差异性表达,某些特定miRNAs表达水平的改变,与宫颈癌的发生发展密切相关。本研究主要是探讨miR-455对宫颈癌SiHa细胞生物学特性的影响及其机制。本研究共分三个部分。一、miR-455在宫颈癌中的表达改变及其miR-455成熟体转染SiHa细胞后表达水平的变化目的:研究miR-455在宫颈癌组织中的表达改变及miR-455成熟体(miR-455mimics)转染SiHa细胞后表达水平的变化。方法:收集宫颈癌及正常宫颈组织标本,提取总RNA,应用荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测miR-455的表达改变。选取人宫颈癌细胞系SiHa细胞为研究对象,转染miR-455mimics,应用实时定量PCR技术检测转染前后各组细胞中miR-455的表达情况。结果:miR-455在宫颈癌组织中较正常宫颈组织表达显著下调,转染miR-455mimics使SiHa细胞中miR-455表达增高。结论: miR-455在宫颈癌中低表达。二、miR-455对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡和周期的影响目的:探讨miR-455对宫颈癌SiHa细胞增殖活性、细胞凋亡及细胞周期等生物学特性的影响。方法:在宫颈癌SiHa细胞中过表达miR-455,通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化情况;结果:转染miR-455mimics使miR-455表达上调,可促进SiHa细胞凋亡,抑制SiHa细胞增殖活性,导致细胞周期G1/S期阻滞。结论:过表达miR-455可以抑制SiHa细胞增殖活性,促进细胞凋亡。提示miR-455可能作为抑癌基因在宫颈癌中发挥作用。三、miR-455靶基因的预测及验证目的:探讨miR-455参与宫颈癌发生发展的机制,为宫颈癌诊断、治疗和预后提供潜在的生物学标志物。方法:应用生物信息学方法预测miR-455的靶基因,应用荧光素酶报告实验和Western blot方法分别从结合能力和相关性方面验证靶基因。结果:数据库预测PIK3R1可能是miR-455的作用靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-455与PIK3R1具有结合能力;过表达miR-455不影响PIK3R1mRNA的表达,但是能抑制PIK3R1蛋白水平的表达;结论:miR-455可能通过转录后调控癌基因PIK3R1的表达来参与宫颈癌的发生发展,为进一步阐明宫颈癌中miR-455的信号调控通路和分子机制奠定基础。