【摘 要】
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【目的】研究核黄素对IL-17A-/-氟中毒小鼠脾脏的影响,为氟免疫毒性的分子机制提供理论基础,同时为氟中毒的预防及干预提供思路。【方法】本实验采用两种模型:（1）将32只13周雄性ICR小鼠分为4组,每组8只,分别为:对照组（蒸馏水）、100 mg/L氟化钠（Na F）组、40 mg/L核黄素组、100 mg/L氟化钠+40 mg/L核黄素组,自由饮水13周。（2）野生型（wide-type,W
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.32072934）； 山西省青年拔尖人才支持计划（2019）； 山西省自然科学基金（201901D111233）； 山西省重点研发计划重点项目课题（201903D211008）；
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【目的】研究核黄素对IL-17A-/-氟中毒小鼠脾脏的影响,为氟免疫毒性的分子机制提供理论基础,同时为氟中毒的预防及干预提供思路。【方法】本实验采用两种模型:（1）将32只13周雄性ICR小鼠分为4组,每组8只,分别为:对照组（蒸馏水）、100 mg/L氟化钠（Na F）组、40 mg/L核黄素组、100 mg/L氟化钠+40 mg/L核黄素组,自由饮水13周。（2）野生型（wide-type,WT）和IL-17A-/-6周龄雄性C57BL/6J小鼠各自分为对照组（0.9%Na Cl）、氟化钠组（24 mg/kg Na F）、核黄素组（5 mg/kg核黄素磷酸钠）、氟化钠+核黄素组（24 mg/kg Na F+5mg/kg核黄素磷酸钠）共8组,每组8只,灌胃给药（每10g小鼠体重灌胃0.1 m L）13周。采用石蜡切片观察小鼠脾脏组织病理学变化。通过酶联免疫试剂盒检测线粒体电子呼吸链中复合体Ⅰ（琥珀酸脱氢酶SDH）、复合体Ⅳ（细胞色素C氧化酶）的活性以及ATP的水平,以评估小鼠脾脏线粒体的功能。运用q RT-PCR检测细胞因子IL-1β,IL-17A,IL-18和核黄素代谢途径中核黄素转运蛋白SLC52A2、SLC52A3、核黄素激酶RFK、FAD合酶FLAD1的m RNA表达水平。应用Western Blotting技术检测SLC52A3、RFK、FLAD1的蛋白表达水平。【结果】（1）氟处理没有改变小鼠脾脏重和脏体比,而核黄素添加使IL-17A-/-小鼠脾脏系数增加。（2）氟处理ICR小鼠脾脏组织发生严重的炎性浸润,使得细胞因子IL-1β和IL-17A表达量升高。而核黄素添加增加了免疫功能,使中性粒细胞增殖,部分恢复了炎性浸润。IL-17A-/-小鼠脾脏仍出现炎性浸润,中性粒细胞增多,细胞因子分泌增多,且核黄素的添加没有产生显著的干预作用。（3）氟中毒改变了小鼠脾脏中核黄素激酶RFK和FAD合酶FLAD1基因表达水平,同时下调了二者的蛋白表达。核黄素添加明显提升了SLC52A3的表达,使被氟改变的蛋白表达恢复至正常水平。而在IL-17A-/-氟中毒小鼠模型中,核黄素添加后,核黄素代谢过程并未产生明显影响。（4）核黄素可以促进SDH和COX的表达,进而促进氟中毒小鼠脾脏ATP的释放。但核黄素对IL-17A-/-氟中毒小鼠线粒体功能没有显著影响。【结论】氟中毒会导致小鼠脾脏发生炎性浸润,导致中性粒细胞增多,炎性因子分泌增多。核黄素通过增强氟中毒小鼠脾脏中核黄素的转运及转化促进线粒体功能,进而缓解氟引起的脾脏炎性浸润。核黄素对IL-17A-/-氟中毒小鼠脾脏炎性浸润缓解作用不明显,具体原因有待进一步研究。
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