论文部分内容阅读
目的：
急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)具有复杂的病理过程,可以引起神经组织和血管结构的破坏,由于其会造成深远的功能障碍,需要长期的治疗和经济支出。从病理的角度,脊髓损伤分为原发性损伤和继发性损伤。原发性损伤本身直接破坏神经组织,通常只造成围绕损伤中心有限细胞的死亡。脊髓继发性损伤扩大了损伤范围,且其造成的损害远远大于原发性损伤。继发性损伤引起广泛脱髓鞘反应、组织水肿及不可逆的细胞丧失。目前临床上只能够对SCI的继发性损伤进行治疗,防止损伤的进一步加剧,最大程度地恢复脊髓功能。对脊髓损伤的治疗尚缺乏有效、毋庸置疑的治疗方法。甲氢泼尼松琥珀酸钠(methyl predni solonesodium succinatc,MPSS)是对脊髓损伤患者标准的干预方法。经临床证实它能改善SCI后患者神经功能并已得到广泛应用。但是MPSS治疗方案最近几年得到了一些质疑,它可能引起一些不良反应如加重缺血、加重神经炎性反应及抑制神经保护因子。促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)能够控制体内的组织氧合作用。人重组红细胞生成素(RecombinanthumanEPO,rHuEPO)生物学上类似于天然的激素,通常被用于治疗贫血患者。最近研究证明内源性或外源性激活EPO受体能够阻止脊髓损伤后神经元的死亡,外源性EPO已应用于不同类型的脊髓损伤以改善氧化应激和炎性损伤。本实验通过建立大鼠急性脊髓损伤模型,应用免疫组化技术,检测用及不用rHuEPO治疗不同时间点pCREB和Bcl-2表达量的变化,初步探讨EPO对脊髓损伤的保护机制。
方法：
取健康成年SD大鼠60只,雌雄不限,体重280-350g,由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为四组:(1)正常组6只,仅给予麻醉;(2)假手术组6只,麻醉后行椎板切除术;(3)对照组,建立脊髓损伤模型后腹腔注射生理盐水,分为术后2h、8h、24h、48h组,每组6只;(4)实验组,建立脊髓损伤模型后腹腔注射rHuEPO(济脉新,华北制药)1000u/kg,分为术后2h、8h、24h、48h组,每组6只。HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点pCREB、Bcl-2的表达变化。用SPSS15.0软件包进行统计,各组数据采用均数士标准差((x)±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,组间存在统计学意义时,并采用Post-hocLSD检验进行两两比较,以P<0.05为有统计学意义。
结果：
镜下观察可见正常和假手术组脊髓组织结构正常,神经元形态完好,核仁清晰,灰白质界限清楚,外周白质致密有序。损伤组表现为脊髓损伤段有广泛出血,脊髓结构破坏,并有炎症细胞浸润。损伤中心部位有大量的神经细胞溶解死亡,白质中可见肿胀轴突和大量空泡,部分神经元尼氏体消失,核固缩。灰质中仅存少量的神经元。EPO实验组镜下可见压迫区也有出血坏死,但脊髓结构的破坏程度较对照组轻,空泡区明显少于对照组,炎症反应较对照组减弱。正常组和假手术组pCREB、Bcl-2阳性细胞少见,对照组pCREB2h开始出现阳性细胞,24h达高峰,48h时阳性细胞减少。实验组与对照组相比,同一时点前者pCREB表达较后者增多。差异有统计学意义,2h和8h(P<0.05),24h和48h(P<0.01)。对照组和实验组2h开始出现Bcl-2阳性细胞,直到48h,一直持续升高。实验组与对照组同一时点相比,Bcl-2表达2h无统计学意义(P>0.05),8h(P<0.05),24h(P<0.01),48h(P<0.01)差异均有统计学意义。
结论：
急性脊髓损伤后注射EPO可以增加神经细胞保护因子pCREB和Bcl-2的表达,抑制细胞凋亡,从而对神经细胞起一定的保护作用。