果胶酶是分解果胶的多种酶的总称,可用于植物纤维中的果胶质的分解。碱性果胶酶指在碱性条件下,能够解聚果胶物质a-1,4糖苷键的酶,一般多指聚半乳糖醛酸裂解酶（PGL）。它除在植物病毒的纯化、纸浆漂白等方面得到应用以外,也广泛应用在棉织物处理、植物韧皮纤维脱胶、果胶废水的处理。碱性果胶酶的使用将改变传统的棉织物处理工艺,不仅减少环境污染,而且节约了大量的工艺用水。本研究从高温堆肥样品中分离得到一株产碱性果胶酶的高温菌株,该菌株为革兰氏阳性细菌,直杆状,菌落圆形,灰白色。16S rDNA序列分析表明,该菌株与Bacilluslicheniformis具有100%的同源性,初步命名为Bacillus licheniformis DG-3。其生长温度范围为15～55℃,最适生长温度为50℃。该菌株发酵液的碱性果胶酶酶活为14.87U/mL。对Bacillus licheniformis DG-3菌株所产碱性果胶酶的初步研究表明,该酶适宜温度范围60～70℃,最适温度为65℃。适宜pH值为9.8～10.5。最适pH值为10.0。通过PCR扩增的方法,从DG-3菌株中扩增出碱性果胶酶的结构基因pe1A,序列分析表明,所获Pe1A基因与已报道的B.licheniformis 14A菌株的pe1A基因的同源性为100%。将pe1A基因在大肠杆菌中表达,产生具有活性的碱性果胶酶,发酵液菌体的碱性果胶酶酶活为12U/mL。4～8mmol/L的Ca²⁺对碱性果胶酶具有显著的激活作用。本研究以甲基对硫磷水解酶基因（mpd）为报告基因,以启动子探针puc-mpd为载体,提取DG-3菌株的基因组,通过鸟枪法构建了启动子文库。经过筛选获得了36个启动子阳性克隆,其中q1、q8、q26的启动子活性较强。对三个阳性启动子克隆的插入片段进行了序列分析。