大鼠是一种重要的实验动物,在生物医学研究中特别是在生殖研究中发挥不可或缺的作用。然而,迄今尚未有简便有效的方法在大鼠上实现重复的精液采集。本论文研究中,通过在大鼠上应用阴茎振动刺激法(PVSE)成功采集到精液,与直肠电刺激法(RPE)相比PVSE法更为简单有效。我们发现用PVSE收集的大鼠精液在采精成功率、运动度、浓度和重量上都显著优于RPE(P<0.05),且畸形率更低。尽管与RPE相比,PVSE的耗时较多,但精液的品质得到显著提升。在应用PVSE中,与五天的重复采精间隔相比,以两天的重复采精间隔采集到的大鼠精液在采精成功率、精子运动度、浓度都显著提高(P<0.05)且畸形率更低。以两天的重复采精间隔对三只大鼠连续使用PVSE法进行采精操作,可持续且稳定采集到高品质的大鼠精液三个月以上。此外,我们发现直肠点刺激所用的电刺激和麻醉剂都会使大鼠精子的运动度显著下降。而对10只老年(60周龄)大鼠应用PVSE法进行采精操作,无一例成功采集到精液。应用PVSE法在雄性大鼠采集到精液后,将大鼠精液注入到4只性成熟假孕雌鼠子宫内进行人工授精,22天后2只雌鼠成功生产出共15个子代。PVSE法采集的大鼠精液分别置于HTF、SR、mKRB+egg、egg、DM、TTE稀释液中并在4℃平衡30min,其中mKRB+egg稀释液中大鼠精子的存活率最高,SR稀释液中大鼠精子存活率最低。大鼠精液分别在25℃与37℃下孵化2h,大鼠精子运动度下降幅度差异不显著(P>0.05)。将PVSE法采集的大鼠精液加入到mKRB+egg稀释液进行冷冻,解冻后大鼠精子运动度是9.8±1.8%。在mKRB+egg稀释液的基础上加入不同浓度的甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇、乙酰胺、DMSO和海藻糖后再进行精液冷冻实验,但均未明显提升大鼠精子经冷冻解冻后的运动度。总之,本论文首次在大鼠上建立高效、非侵入、可重复采集精液的人工采精方法。