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背景:CD8+T细胞在淋巴系统中发挥着重要作用,是机体及时清除肿瘤细胞、病毒感染细胞的关键免疫细胞之一,目前过继性输注活化的CD8+T细胞已在临床上用于一些疾病治疗。但是,过继性输注CD8+T细胞的细胞毒作用容易受到多种因素影响,如活化状态、迁移和杀伤能力。血小板与先天性免疫和适应性免疫的调节密切相关,活化血小板自身能够释放抗菌蛋白,防止病原体入侵机体同时,活化血小板还能与中性粒细胞、树突状细胞（Dendritic cells,DC cells）、B细胞以及T细胞发生相互作用,激活并使其发挥免疫防御功能。当机体发生严重细菌、病毒感染或处于肿瘤晚期阶段时,血小板活化程度增高,数量减少,其功能、形态结构发生变化,且免疫细胞功能低下。在体外,活化血小板能够增强多种免疫细胞的功能。血小板颗粒中储存着大量的趋化因子、活性因子和活性蛋白,血小板活化后会将颗粒中储存的物质释放到胞外。而活化血小板对CD8+T细胞是否也具有免疫促进作用呢?为此,本文将探究活化血小板与CD8+T细胞共孵育后对CD8+T细胞迁移能力、杀伤功能和活化水平的影响。目的:探究不同激活剂对CD8+T细胞活化状态的影响,从而选择一种有效激活细胞的激活剂并探索活化血小板是否影响CD8+T细胞的迁移能力、杀伤效应以及激活水平,初步探究活化血小板影响CD8+T细胞效应的分子机制。方法及结果:C57BL/6小鼠脾脏经研磨、裂红和免疫磁珠分选后获得CD8+T细胞,分别置于含有Con A、Anti-CD3/28的孔板中活化培养,比较两种激活剂对CD8+T细胞激活效应的影响。向分离得到的CD8+T细胞分别加入与CD8+T细胞个数比例为0:1,10:1,50:1,100:1的活化血小板,置于细胞小室中共培养。之后通过蛋白免疫印记（Western Blot,WB）鉴定趋化因子受体蛋白CCR9的表达情况,采用激光共聚焦检测活化血小板对细胞骨架与迁移能力的影响,利用分子成像技术实时监测CD8+T细胞的病毒清除能力,采用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）对肝脏组织染色,鉴定淋巴细胞的肝脏浸润情况。并采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、T细胞激活及趋化因子受体表达水平情况,采用细胞多因子免疫磁珠检测细胞分泌的细胞因子,建立E.G7-OVA皮下肿瘤模型来评估活化CD8+T细胞的靶细胞杀伤效应。以下为实验结果:（1）CD8+T细胞激活剂对细胞增殖、活化、趋化因子受体表达和杀伤作用的影响。实验结果显示:使用Con A活化的CD8+T细胞其增殖数量为（19.7±1.0）×10~6个,显著多于Anti-CD3/28组,且短期激活标志物CD69表达上调,而Anti-CD3/28组CD8+T细胞较Con A组体外杀伤活性更为显著。同时体内肿瘤杀伤实验也证明了Anti-CD3/28组CD8+T细胞杀伤能力较Con A组强。两组在趋化因子受体的表达水平上无明显差异。（2）活化血小板对CD8+T细胞迁移能力的影响。实验结果显示:10:1组其CD8+T细胞趋化因子受体CCR9的MFI（1883.000±79.690）要显著高于其他对照组,而CCR5、CCR4、CCR7和CXCR3的表达水平无明显差异。WB结果也显示CCR9蛋白表达水平上调,灰度值为1515.686。通过激光共聚焦发现经过10倍活化血小板处理的CD8+T细胞其细胞骨架发生了变化,微丝蛋白MFI（3084.000±265.600）和微管蛋白MFI（2237.000±171.900）显著增加,同时,其迁移速度（0.159±0.017）μm/sec与迁移距离（124.800±8.339）μm也显著高于其他各组。（3）活化血小板对CD8+T细胞体内杀伤作用的影响。将活化血小板孵育后的CD8+T细胞输注至转染可视化OVA病毒体内,观察病毒的发光情况。实验结果显示:10:1组其小鼠体内荧光值为（9.608±5.258）×10~6p/s/cm~2,肝脏荧光值为（1.475±0.290）×10~7p/s/cm~2,肝门淋巴结中CD8+T细胞表达颗粒酶B（Granzyme B）的MFI为（816.000±23.350）,血清中ALT蛋白水平（1434.000±116.200）U/L和AST蛋白水平（942.500±65.090）U/L,与其他组相比具有统计学意义差异,并且其肝脏中淋巴细胞浸润明显增多。在肿瘤模型中发现,10:1组其小鼠体内肿瘤组织横切面面积为（0.055±0.019）cm~2,肿瘤组织明显小于对照组。将血小板中的CCL21、CXCL9、CXCL10以及P-选择素（P-selectin）、TGF-β分别与CD8+T细胞孵育,发现CCL21能够增加CCR9的表达水平。结论:Anti-CD3/28组CD8+T细胞其在体内外杀伤能力较Con A组强,Anti-CD3/28更适用于CD8+T细胞的激活及深入研究,加入血小板后促进了CD8+T细胞的体外迁移能力,从而加强了CD8+T细胞的体内杀伤效应。