枯草芽孢杆菌生产乙偶姻和(2R,3R)-丁二醇的发酵调控

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bitao6633620
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
2,3-丁二醇(2,3-BD)及其前体乙偶姻(AC)是具有混酸代谢途径微生物的典型发酵产物,在调味剂、燃料添加剂、溶剂、聚酯、橡胶和燃料等领域具有广泛应用。本研究通过诱变筛选得到一株可产乙偶姻和2,3-丁二醇的枯草芽孢菌株,优化了发酵培养基,并研究了供氧对乙偶姻和2,3-丁二醇转化的调控。该菌株的产物分布具有鲁棒性,且产物得率高,具有工业化应用前景。首先,进行了产乙偶姻和2,3-丁二醇的芽孢杆菌的筛选。通过对海泥样品的富集培养、单菌筛选,得到三种类型的菌株,分别为:以产2,3-BD混合物为主的菌株2-2;以产(2R,3R)-BD为主的菌株10-1;以产(3R)-AC为主的菌株GM3-6,但(3R)-AC产物浓度较低。此外,对前期课题组保存的枯草芽孢杆菌DL01进行低温等离子体+5-溴尿嘧啶的复合诱变筛选得到突变菌M9。其次,对发酵培养基进行优化。比较了不同组成发酵培养基对产物浓度的影响,初步确定发酵培养基的组成;通过单因素实验考察了初始糖浓度、无机氮源、有机氮源对菌体生长和产物生成的影响;通过PB实验,确定发酵培养基中组分对总产物浓度影响显著的因素及影响力大小为:酵母粉>玉米浆干粉>硫酸锰;最后,通过最陡爬坡实验确定了发酵培养基最终组成为:葡萄糖160 g/L;FM760安琪酵母浸粉7 g/L;玉米浆干粉12 g/L;KH2PO46 g/L;Mn SO40.13 g/L。最后,考察不同供氧条件对菌体生长及代谢的影响。在0.2 vvm、ORP值为-190~-220m V条件下发酵,产物以(2R,3R)-BD为主,批式发酵58 h得75.0 g/L 2,3-BD和乙偶姻,生产强度为1.39 g/L/h,得率为0.47 g/g糖,其中,(2R,3R)-BD为53.0 g/L,占2,3-丁二醇总浓度的92%;在0.25 vvm、ORP值为-120~-150 m V时条件下发酵,产物以乙偶姻为主,批式发酵49 h得65.1 g/L 2,3-BD和乙偶姻,得率为0.44 g/g糖,生产强度达1.33g/L/h,其中,含乙偶姻50.3 g/L,占产物总浓度的77%。对这两个典型条件取样进行转录组分析,发现在供氧充足的条件下,乙酰乳酸合成酶(als S)、乙酰乳酸脱羧酶(bud A)下调,2,3-丁二醇途径碳通量减少,因而产物得率下降;2,3-丁二醇脱氢酶转录水平下调,有利于积累乙偶姻;与还原力NADH及能量ATP相关基因表达量增大;与ABC转运蛋白物质运输相关的基因上调表达;与鞭毛组装相关基因下调表达;与氮代谢相关基因呈现出不同程度的变化,此外,与孢子生成相关基因的表达也出现显著上调,应与乙偶姻积累有关。
其他文献
在植物生命活动中,lncRNA广泛参与植物生长发育和胁迫过程,已成为全球基因调控、发育和环境响应的重要研究课题,其中lncRNA与蛋白质的相互作用在植物免疫和生命活动中发挥着重要的调控作用。由于实验室方法耗时耗力,研究人员逐渐开始利用计算机技术辅助预测,为实验室方法提供帮助和支持。然而,与动物领域相比,在植物中的研究还不成熟。由于缺乏实验验证的相互作用数据,植物数据集中已知相互作用关系的样本与未知
学位
抗生素为畜牧养殖业的发展做出了贡献,但随着行业和技术的发展问题也随之而来,抗生素的问题主要为增强病原菌的耐药性、造成抗生素残留、损害动物免疫功能、和微生物环境破坏。而中草药是最佳的抗生素替代品,天然无毒,甘草便是其中之一。甘草中的甘草黄酮具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用,具有一定的促进动物生长功效,有着广阔的前景和巨大的应用潜力。甘草在工业生产中,经过提取后会剩余大量的甘草残渣,由于甘草酸、甘草次酸和
学位
三酰基甘油(Triacylglyceol,TAG)在植物体内的生物合成主要发生在内质网中,该过程涉及脂肪酸底物从叶绿体到内质网的转移过程。微藻叶绿体定位的脂肪酸转运蛋白(FAX1和FAX2)和一种内质网定位的ATP结合型转运蛋白(ABCA2)最近被报道参与脂肪酸转运对脂质合成起重要作用,但两种脂肪酸转运蛋白对TAG的合成是否具有协同作用及其调控机制至今还不清楚。本研究首先构建了FAX1/FAX2融
学位
基于各种有机、无机的纳米药物递送系统在癌症靶向治疗和其他方面研究中获得越来越多的关注并在实际中被广泛应用。在药物递送领域的研究中,与有机纳米材料相比,无机纳米材料具有更加易于控制、修饰和联合治疗等优势。更重要的是,无机纳米材料中的多组分“核-壳”结构可以通过修饰不同的基团实现多功能特性,因此“核-壳”结构纳米复合物在药物靶向递送、生物医学成像以及精确治疗等领域具有重要的应用价值。同时多组分“核-壳
学位
在自然环境中存在很多刺激因素,它们会引发生物机体、细胞产生应激反应,这些刺激因素被称为应激原。人体经常暴露在许多应激原中,这使得人类自身进化出许多防御和延缓机制。MAPK通路(丝裂原活化蛋白激酶通路)是真核生物中应用最广泛、最关键的应激反应信号通路。其中ASK1(凋亡信号调节激酶1),又称MAP3K5,是MAPK家族成员之一,其异常表达会导致多种应激性疾病,如非酒精性脂肪性肝炎和多发性硬化症。因此
学位
临床上梨状肌综合征的治疗方法较多,其中尤其以针灸推拿疗法效果明显,且副作用小,易于被患者所接受。本文主要通过针刺治疗、灸法治疗、推拿治疗、针灸推拿联合中药及联合康复治疗,对近年来针灸推拿治疗梨状肌综合征进行研究,认为临床上治疗本病所采用的方法呈现出几种疗法相互联合的趋势,通过各种疗法的优势互补,效果更加显著,需作进一步的探讨。
期刊
在许多肿瘤细胞,如结直肠癌细胞系、骨肉瘤细胞系中发现某些核心时钟基因表达下调,将其过表达后,有助于疾病的治疗与预后。但生物钟基因过表达后细胞节律及表型的变化尚不清楚,本文研究内容如下:(1)利用无缝克隆技术构建核心时钟基因bmal1、clock、cry1和cry2的质粒表达载体。(2)在骨肉瘤细胞U2OS中通过瞬时转染分别过表达bmal1和clock、cry1和cry2。在m RNA和蛋白水平验证
学位
随着水产养殖行业的快速发展,水产养殖饵料的需求逐年攀升。湛江等鞭金藻作为优质的育苗饵料,对于水产养殖行业非常重要。然而受限于湛江等鞭金藻循环培养、收获及低温保存技术的发展和成本,至今湛江等鞭金藻大规模集约化生产和供应尚存在很大挑战。因此本论文就湛江等鞭金藻循环培养技术、收获技术以及低温保存技术开展了探究。湛江等鞭金藻30005在仅补充了微量元素而未处理的循环培养基中无法实现正常的生长,表明可能受到
学位
在我国,乳腺癌作为一种最常见的女性癌症,一直威胁女性健康并呈逐年上升趋势。尽管最近在乳腺癌治疗方面取得了进展,包括化疗、内分泌治疗和HER2靶向治疗,但乳腺癌细胞的高增殖性、侵袭性、转移性潜力以及耐药性,一直是乳腺癌患者治疗失败和生存率低的主要原因。根据已有的研究表明,发现KLF家族成员参与乳腺癌发生发展并起到关键作用。KLF9(锌指转录因子)同多种类型癌症的发生和不良预后密切相关。有数据表明,K
学位
药物相互作用是药物不良反应的主要原因之一,每年因为发生严重的药物相互作用而导致大量患者的死亡。随着药物基因组学的进展,药物相互作用的定义在不断扩展,包括药物基因相互作用(DGI)和药物药物-基因相互作用(DDGI)。药物基因相互作用(DGI)已经纳入到一些治疗指南中,而关于药物药物-基因相互作用(DDGI)的研究却十分有限。细胞色素P450酶在药物相互作用中起着重要的作用,而关于细胞色素P450酶
学位