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为研究葎草总黄酮对乳腺上皮细胞相关基因表达的影响,本实验将奶牛乳腺上皮细胞作为细胞模型,利用MTT法检测细胞的活率及生长状况,分别用不同浓度的黄酮溶液(0、100、200、400、600、800 mg/L)刺激奶牛乳腺上皮细胞12 h,再用相同浓度的黄酮溶液(400 mg/L)作用于奶牛乳腺上皮细胞不同时间(0h、1h、4h、9h、12h、16h、24h),分别提取细胞的总RNA,运用荧光定量PCR法测定GHR、β-CN、IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ泌乳相关基因的表达并进行研究。得出如下结果:1)细胞生长到第4d时,存活的细胞数最多,在第4d以后,存活的细胞数量呈下降趋势,符合MTT法检测细胞生长的一般规律。2)不同浓度的黄酮溶液刺激奶牛乳腺上皮细胞12h后,IL-6在黄酮浓度为100-800 mg/L时表达量降低且差异均显著(P<0.05),但在800 mg/L时表达量最低;IL-8的表达量在黄酮浓度为800 mg/L时也有所降低,但差异不显著(P>0.05);在黄酮浓度为100-600 mg/L时TNF-α的表达量都降低,但在200 mg/L时表达量最低(P<0.05);IFN-γ的表达量在黄酮浓度为200-400 mg/L时有所降低,但在200 mg/L时其表达量最低(P<0.05)。3)不同浓度的黄酮溶液刺激奶牛乳腺上皮细胞12h后,黄酮浓度在200 mg/L时促进GHR的表达,但差异不显著(P>0.05);在黄酮的浓度为100-800 mg/L时对β-CN的表达有上调的作用,200-600 mg/L的黄酮浓度对β-CN的表达可显著提高(P<0.05),但在黄酮浓度为400 mg/L时,β-CN的表达量最高。4)相同浓度(400 mg/L)的黄酮溶液作用于乳腺上皮细胞不同时间,IL-6在作用于细胞4-9h时表达量降低(P<0.05),但在作用9h时表达量显著降低;IL-8在作用1 h时表达量降低,差异显著(P<0.05);TNF-α在作用1-24 h时表达量都降低,但在12h时,其表达量降低明显(P<0.05);IFN-γ的表达量在作用细胞1-24 h时也降低,但在12h时降低显著(P<0.05)。5)相同浓度(400 mg/L)的黄酮溶液作用于乳腺上皮细胞不同时间,在作用于细胞4-9h时对GHR的表达都有促进作用,但在作用4h时其表达明显升高(P<0.05);在作用4-12h时,对β-CN的表达也有促进作用且差异显著(P<0.05),但在作用12 h时表达量最高。本研究可以得出如下结论:1)对奶牛乳腺上皮细胞进行培养,在第4d时,此细胞的存活力最强。2)葎草黄酮对乳腺上皮细胞相关炎症因子的表达与其剂量及作用时间有关,黄酮浓度为800 mg/L,作用于乳腺上皮细胞(MAC-T)9h后,可以显著地降低IL-6炎症因子的表达;黄酮浓度为200 mg/L,作用时间12h后,能显著地降低TNF-α和IFN-γ的表达。这对乳腺细胞相关炎症基因的表达可能有一定的抑制作用。3)培养奶牛乳腺上皮细胞第4天时,细胞的存活力最强,即在此时的细胞最具研究价值。葎草黄酮对乳腺上皮细胞相关泌乳基因的表达与其剂量及作用时间有关,黄酮浓度为400 mg/L,作用时间12 h后,对β-CN的表达具有正向调节作用;黄酮浓度为400 mg/L,作用4 h时,这对GHR的表达具有促进作用。这些都表明其对乳腺细胞的生长和发育起到重要的作用。