【摘 要】
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单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）是一种广泛存在于食品以及食品工业中的致病菌。长时间处于持续的亚抑菌浓度BC中的Lm表现出对BC的适应性耐受。有研究表明,agr系统与细菌的耐药以及生物被膜形成有关。agr系统是一个全局性调控系统,由经典的双组分信号传导模块控制编码细胞内大多数基因的表达。因此,本研究探究agr系统在Lm对抑菌物质耐药以及生物被膜形成中的作用,
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单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）是一种广泛存在于食品以及食品工业中的致病菌。长时间处于持续的亚抑菌浓度BC中的Lm表现出对BC的适应性耐受。有研究表明,agr系统与细菌的耐药以及生物被膜形成有关。agr系统是一个全局性调控系统,由经典的双组分信号传导模块控制编码细胞内大多数基因的表达。因此,本研究探究agr系统在Lm对抑菌物质耐药以及生物被膜形成中的作用,首先探究Lm BC适应性耐受菌株对不同抑菌物质的最小抑菌浓度（MIC）值,生物被膜形成,运动性以及粘附能力。研究表明,生物被膜的形成与agr系统相关,测定了BC适应性耐受菌株的agr系统转录水平。其次,构建基因缺失突变株,检测基因缺失突变株对不同抑菌物质的MIC值以及基因缺失突变株生物被膜的形成。最后通过转录组学测序分析筛选AgrA蛋白可能调控的靶基因,并探究靶基因在Lm耐药以及生物被膜形成中的作用。本文章的主要结论如下:（1）BC适应性耐受菌株具有多重耐药性,可以形成成熟的生物被膜。与野生株相比BC适应性耐受株对BC、头孢类抗生素的MIC值有所上升;BC适应性耐受菌株形成的生物被膜结构更加完整。以上结果表明,Lm BC适应性耐受株对抑菌物质产生耐药性,生物被膜形成能力增强。（2）agr系统参与Lm对BC的耐药以及生物被膜的形成。通过同源重组法构建了agrA,agrB/D,agrC,agrC/A,agrB/D/C以及agrB/D/C/A,检测基因缺失突变株对不同抑菌物质的MIC值。结果显示,缺失agrA后,菌株对头孢噻肟的MIC值下降;缺失agrB/D和agrC后,菌株对环丙沙星的MIC值都下降;缺失agrC/A后,菌株对头孢噻吩的MIC值下降,对BC的MIC值上升;缺失agrB/D/C/A后,菌株对头孢噻吩的MIC值下降,对红霉素的MIC值上升。缺失agr系统后,菌株形成生物被膜的能力减弱。（3）多个靶基因受AgrA调控。转录组以及RT-qPCR的结果分析表明,缺失agrA后,菌株在BC刺激后,多个基因表达有差异。EMSA验证lmo1172/73,lmo2713/14,lmo2360/61,lmo1864基因受AgrA调控,lmo0986/87,lmo2360/61参与Lm对不同抑菌物质耐药以及生物被膜的形成。综上所述,本研究结果表明,agr系统参与Lm的耐药以及生物被膜的形成。
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