负载BMSCs与地塞米松的ChSMA水凝胶对大鼠关节软骨损伤修复的作用

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目的:研究一种能负载干细胞及地塞米松的,可注射光响应水凝胶,并考察其对骨髓间充质干细胞存活、增殖和成软骨分化的作用,以及在SD大鼠膝关节软骨损伤修复中的作用。方法:1.在硫酸软骨素的基础上,利用甲基丙烯酰胺基团与其反应,赋予其光响应性能力,制备出ChsMA水凝胶;通过核磁共振氢谱试验、傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析、场发射扫描电子显微镜检测、流变学测试、相关机械性能测试其物理性能及表征,并制成负载BMSCs与地塞米松的ChsMA水凝胶复合材料。2.体外实验:将BMSCs在与ChsMA水凝胶浸提液进行共培养,并于相应时间用细胞Lwe/Dead染色方法测定细胞毒性和干细胞的增殖能力,并通过阿利辛蓝染色,检测组织中的酸性粘多糖蛋白的生成。3.体内实验:首先构建大鼠膝关节软骨缺损模型,原位注射相应材料,并随机分为空白组、ChsMA水凝胶组、ChsMA水凝胶+干细胞组以及负载BMSCs与地塞米松的ChsMA水凝胶组,在术后第6周和第12周取大鼠膝关节标本行大体肉眼、组织学染色、免疫组化对比修复效果,并用ICRS评分标准进行组织学评分评估软骨修复效果。结果:1.在紫外光照射30~40s下ChsMA水凝胶具有由液态到固态之间转变的流变学特征,且浓度为10%(w/v)的ChsMA水凝胶具有最大储能模量及最强的抗压缩能力,以及其他良好的力学性能。2.ChsMA水凝胶浸提液对BMSCs的增殖无抑制作用,并且ChsMA水凝胶与地塞米松的浸提液提高了其组织中的酸性粘多糖含量。3.体内动物实验显示术后原位注射相应材料,第6周和第12周后实验组的大体肉眼观察显示实验组的修复结果优于对照组,组织学染色结果也提示负载BMSCs及地塞米松的ChsMA水凝胶可促进特异性软骨细胞外基质合成,免疫组化结果示此材料也可促进软骨Ⅱ型胶原在修复组织中的生成;ICRS组织学评分示ChsMA水凝胶组+BMSCs+Dex组修复效果高于其余组,差异有显著性(P<0.05)。结论:ChsMA水凝胶具有优异的光固化特性、机械强度和生物相容性,提高软骨细胞Ⅱ型胶原的形成,负载BMSCs与地塞米松的ChsMA水凝胶能够促进大鼠体内膝关节软骨缺损的修复。
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