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在本研究中,首先检测了UVC照射对HeLa细胞中TIAR的蛋白质表达水平及细胞内定位的影响,结果证实TIAR的蛋白质表达水平没有显著变化,但是UVC照射可以诱导TIAR部分地出核。
为了研究TIAR的蛋白质分子结构与细胞内定位的关系,构建了TIAR全长、N端及C端的EGFP融合蛋白表达载体并进行瞬式转染,发现EGFP-TIARFL在细胞内的分布与细胞免疫荧光的结果一致,即:正常情况下浓集于细胞核,中或高剂量UVC照射后部分的出核;EGFP-TIARM123均匀的分布于细胞核和细胞浆,在高剂量UVC照射时几乎全部出核。
还对过表达TIAR缺失体的HeLa细胞进行UVC照射,检测细胞凋亡情况。结果发现稳定过表达EGFP-TIARRRM123抑制UVC照射诱导的HeLa细胞凋亡;而过表达EGFP-TIARQ-rich则促进UVC照射诱导的HeLa细胞凋亡。另外通过流式细胞仪对细胞周期分布进行分析,发现瞬时转染过表达EGFP-TIARFL及EGFP-TIARRRM123促进细胞从G1向S及G2/M期的转换,但是当UVC照射后却反而抑制细胞从G1向S及G2/M期转换;而过表达C端Q-rich结构域则对细胞周期没有显著影响,UVC照射后的细胞周期变化也与转染空载体的细胞相同。
以上的研究结果表明:1)TIAR通过细胞内定位的改变而非蛋白质表达量的改变来参与UVC照射引起的细胞凋亡等效应;2)C端Q-rich结构域对于TIAR在正常情况下浓集于细胞核是必需的,并且妨碍UVC照射引起的TIAR的出核;3)TIAR的N端抑制UVC照射诱导的细胞凋亡,而C端却促进细胞凋亡;4)TIAR全长及N端促进细胞从G1向S及G2/M期的转换,而在UVC照射诱导凋亡时抑制细胞从G1向S及G2/M期的转换,这可能是N端抑制凋亡的机制之一;而C端对细胞周期则没有影响。