乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白HBSP与肝细胞泛转录表达因子的相互作用

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乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白(hepatitis B spliced protein,HBSP)是由2447nt-489nt单剪接型2.2Kb HBV剪接变异体编码产生的一种蛋白。已有研究显示,它可诱导肝细胞凋亡,与肝硬化发生呈正相关;HBSP还可诱导特异性CTL活性,导致肝脏损伤。目前该蛋白的具体致病机制仍未阐明,为了更深入了解其致病性,本实验室在前期研究工作中,以酵母双杂交筛选的方法获得了多个与HBSP相互作用的肝细胞蛋白,泛转录表达因子(Ubiquitously expressed transcript,UXT)即是其中之一。本研究首先构建pCMVTNT-UXT重组载体,利用TNT兔网织红细胞裂解物转录/翻译偶联系统体外转录翻译UXT蛋白,诱导表达和纯化GST-HBSP融合蛋白,通过GST pull-down实验,证实了HBSP和UXT在体外具有直接相互作用。进一步通过哺乳动物细胞双杂交,将pBIND-HBSP与pACT-UXT重组质粒和报告基因载体pG5luc共转染肝癌细胞株Huh7细胞,结果证实HBSP和UXT在哺乳动物细胞存在相互作用。另外,本研究成功包装表达HBSP的重组腺病毒,为进一步研究UXT与HBSP在肝细胞的相互作用以及对HBSP肝细胞功能的影响奠定了基础。
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