目的本研究拟通过体外分离、培养人牙周膜细胞群，探索及检测木犀草素和橙皮素对人牙周膜细胞群增殖及骨向分化能力的影响，探索此两种中药有效组分应用于牙周疾病治疗的可能性，为科学合理的推进中药有效组分在牙周病的应用，促进中药的国际化提供理论基础和实践参考。方法本研究采用盖玻片覆盖组织块法对牙周膜细胞进行原代培养，在倒置显微镜下观察牙周膜细胞的生长状况；MTT法绘制细胞生长曲线；免疫组织化学法鉴定细胞来源；并对细胞进行成骨诱导及茜素红染色；采用MTT四唑盐比色法、考马斯亮蓝染色法、ALP碱性磷酸酶检测试剂盒、Q-PCR检测成骨相关基因等方法观察不同浓度木犀草素、橙皮素对牙周膜细胞群增殖、蛋白含量及骨向分化的影响。结果1、镜下观察牙周膜细胞第3-9d从组织块中游出，细胞排列无序，大部分呈长梭形，胞体饱满，具有细而长的胞突，胞质均匀，细胞核位于细胞中央、呈圆形或卵圆形。少量细胞较小且形态不规则；细胞生长曲线测定显示第3代牙周膜细胞群（periodontal ligament cell population, PDLP）生长曲线呈“S”型；免疫组化结果显示：第3代PDLP波形丝蛋白强阳性表达，角蛋白染色阴性表达；PDLP成骨诱导：矿化诱导组大量矿化结节形成。2、不同木犀草素和橙皮素对PDLP增殖及蛋白含量的影响①MTT结果显示：木犀草素、橙皮素作用于PDLP24、48、72h，各浓度组（100μM、10μM、1μM、0.1μM、0.01μM）均可促进牙周膜细胞的增殖（P<0.05）。②考马斯亮蓝染色法结果显示：1）木犀草素各实验组细胞内总蛋白含量均高于对照组（P<0.05），1μM木犀草素总蛋白含量较其他实验组高（P<0.05）2）橙皮素各实验组细胞内总蛋白含量均高于对照组（P<0.05），0.1μM木犀草素总蛋白含量较其他实验组高（P<0.05）。3、木犀草素和橙皮素对PDLP骨向分化的影响①ALP碱性磷酸酶检测试剂盒结果显示：1）木犀草素各实验组ALP活性均高于对照组（P<0.05），1μM橙皮素对应OD值较其他各实验组高（P>0.05），10μM浓度木犀草素对应OD值交其他各实验组低（P<0.05）2）橙皮素各实验组ALP活性均高于对照组（P<0.05），0.1μM橙皮素ALP活性较其他各实验组高（P>0.05）。②Q-PCR检测结果显示：1）木犀草素作用72h，实验组ALP表达均呈上调趋势，其中1μM组上调最为显著，0.01μM组ALP表达上调无统计学差异（P>0.05），其余实验组ALP表达上调均有统计学差异（P<0.05）。1μM和0.1μM组RUNX2表达上调，具有统计学差异（P<0.05）。2）橙皮素作用72h，实验组ALP表达均呈上调趋势，其中0.1μM组上调最为显著，0.01μM组ALP表达上调无统计学差异（P>0.05），其余实验组ALP表达上调均有统计学差异（P<0.05）。0.1μM和00.1μM组RUNX2表达上调，具有统计学差异（P<0.05）。结论1、盖玻片覆盖组织块法可成功培养出牙周膜细胞群，成功率高，来源可靠，细胞生长状态良好，且在一定条件下可以骨向分化。2、一定浓度的木犀草素可以促进牙周膜细胞群的增殖和骨向分化。3、一定浓度的橙皮素可以促进牙周膜细胞群的增殖和骨向分化。4、本实验为木犀草素和橙皮素进一步应用于牙周组织再生修复提供了一定的参考价值，但是二者的作用机制还需要进一步的实验研究。