斑马鱼两型生长抑素受体的时空表达研究

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生长抑素(SS)信号通路在生物体的生长发育以及其它许多生理过程中起着重要的调控作用,它既可以作为一种神经递质参与大脑的活动过程,如感觉认知及自主调节功能,抑制许多神经系统分泌的激素如生长激素的释放;同时生长抑素又可以作为一种内分泌物质调节生物体的功能。生长抑素受体(SSTR)在介导由SS引起的信号途径中起着关键性的作用。生长抑素受体(SSTR)是一种具有七次跨膜结构的膜结合蛋白,在哺乳动物中有五种类型的SSTR,分别由位于不同染色体上面的基因编码,还有一些亚型具有可变剪接位点,产生几种相似的变体。关于SSTR的研究多集中在哺乳动物,关于非哺乳脊椎动物中SSTR的研究较少,特别是该信号通路在发育中的功能尚未阐明。本研究利用斑马鱼作为研究模型,运用RT-PCR和核酸原位杂交的方法克隆了斑马鱼的两种生长抑素受体(sstr1b,sstr2) cDNA并进行了早期胚胎发育时期的时空表达研究。斑马鱼中SSTR具有四种类型:sstr1,2,3,5,每种类型又具有许多不同的亚型。根据相应基因在NCBI上的登陆号,使用RT-PCR技术克隆了sstr1b,sstr2开放阅读框的部分cDNA序列,将其连接入克隆载体PMD-19T中并测序验证。然后将cDNA片段亚克隆进入pCR-bluntⅡ-topo载体,合成地高辛标记的核酸探针用于原位杂交实验。结果显示,斑马鱼胚胎中约在24小时左右sstr1b mRNA开始表达,主要表达部位集中于端脑中的一些神经簇,其表达部位及含量在受精后胚胎不同的时间段中一直比较稳定。而我们最早在22小时胚胎中发现了sstr2在的表达,其分布更为广泛,遍布整个神经轴,丘脑下部的一些神经簇,后脑的绝大部分以及整个髓核神经元中都发现了sstr2 mRNA存在,在受精后24小时左右端脑中也开始出现sstr2 mRNA的阳性表达信号。为下一步研究SSTR信号途径在斑马鱼发育中功能打下基础。
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