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目的通过调节软骨细胞骨架蛋白结构,分析软骨细胞成软骨细胞表型是否发生改变,探讨软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系。方法体外分离、二维培养新西兰兔软骨细胞,待细胞达到一定数量后,采用三维微团培养法培养软骨细胞2周,随机将软骨细胞分为对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组,通过加入秋水仙碱、细胞松弛素B及丙烯酰胺分别调节软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝,继续培养1周、3周,从大体形态、组织切片HE染色、阿尔新蓝染色、免疫组化染色分析成软骨细胞表型的改变。结果1.软骨细胞行三维微团培养2周后,可形成肉眼明显可见的细胞微团组织,呈扁椭圆形,色白,质软,弹性可;2.不同药物处理1周,质量上发现对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组相比无明显差异(4.97?0.0963,4.7678?0.2997,4.84?0.3246;P>0.05),与丙烯酰胺组相比有较大差异(4.97?0.0963,2.8133?0.2444;P<0.05);3周时,对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素B组及丙烯酰胺组在质量上无明显差异(8.8444?0.7012,8.4789?0.6473,8.4633?0.6837,8.0767?0.2779;P>0.05);3.HE染色显示,不同药物处理1周时,对照组、秋水仙碱组及细胞松弛素B组细胞较密集、均一,丙烯酰胺组细胞较少、分散;3周时,对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素b组及丙烯酰胺组软骨细胞形成类软骨陷窝现象,细胞分布均一;4.阿尔新蓝染色发现,不同药物处理1周时,对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素b组相比糖胺聚糖表达较多,各组无明显差异(0.6012?0.0672,0.5657?0.0514,0.5686?0.0568;p>0.05),与丙烯酰胺组相比有较大差异(0.6012?0.0672,0.1517?0.0484;p<0.05);3周时,对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素b组及丙烯酰胺组糖胺聚糖均为高表达,各组间无明显差异(1.6947?0.4163,1.5416?0.3437,1.7884?0.2861,1.7382?0.3107;p>0.05);5.免疫组化染色显示,药物处理1周时,对照组与秋水仙碱组、细胞松弛素b组相比colⅡ(0.0894?0.0054,0.0859?0.0024,0.0829?0.0066)表达多,colⅠ(0.0013?0.0002,0.0017?0.0002,0.0016?0.0056)表达少,各组间无明显差异(p>0.05);与丙烯酰胺组相比colⅡ(0.0894?0.0054,0.0289?0.0099)、colⅠ(0.0013?0.0002,0.1071?0.0012)表达有较大差异(p<0.05);3周时,对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素b组及丙烯酰胺组colⅡ(0.1904?0.0471,0.1904?0.0471,0.1856?0.0224,0.1772?0.0353)表达多,colⅠ(0.0675?0.0056,0.0693?0.0079,0.0722?0.0051,0.0746?0.0135)表达少,各组间无明显差异(p>0.05)。结论1.微管、肌动蛋白微丝发生变化,不影响正常软骨细胞特异性表型糖胺聚糖、colⅡ继发改变。2.波形蛋白中间纤丝发生变化,短期内出现软骨细胞特异性表型糖胺聚糖、COLⅡ表达下降,纤维化软骨细胞特异性表型COLⅠ表达增多;但延长作用时间而不增加作用强度时,则不影响正常软骨细胞特异性表型糖胺聚糖、COLⅡ继发改变。